生殖器念珠菌病患者都柏林念珠菌的分离与PCR-RFLP方法鉴定

发布时间：2021-07-03 12:06

　　目的:通过温度试验等表型方法分离都柏林念珠菌,同时建立一种简单、可靠、快速的基因型鉴定方法,并调查本地区性病门诊生殖器念珠菌病患者都柏林念珠菌的感染率。 方法:收集了2002年10月～2005年3月期间到天津市性传播疾病研究所门诊就诊的生殖器念珠菌病的400例临床菌株和北京大学真菌和真菌病研究中心馈赠的白念珠菌标准菌株ATCC-11006、都柏林念珠菌标准菌株CBS—8501作为样本,所有临床菌株均经过表型方法鉴定为原白念珠菌（包括白念珠菌和都柏林念珠菌）。首先将上述402例菌株活化两次后进行45℃温度试验。然后,将45℃温度试验中生长不良的待检菌株沙氏液体培养基增菌,尿素裂解液对菌细胞裂解,异丙醇沉淀法制备DNA模板,采用PCR的方法对核糖体DNA内部转录间隔区ITS的编码基因进行核酸扩增。最后用HpyF10VI酶切PCR产物,8%聚丙酰胺凝胶垂直电泳后紫外线灯下观察带型。 结果:经过3遍温度试验后,41例临床菌株和1例都柏林念珠菌标准株几乎无生长。PCR产物酶切后进行8%聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳,显示2种带型,1种带型示3条条带,在100～200bp之间有2条条带,在20... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

沙堡罗固体培养皿45℃温度试验后的菌落生长情况

12345678凝胶水平电泳图。泳道l:DNAmarkor(100，200，300，400，500，15003、4:白念珠菌临床株;泳道5:阴性对照;泳道6:都柏林念床株;泳道8:DNAmar一、er(100，200，300声00，500，600bp)。行8%聚丙烯酞胺凝胶垂直电泳(如图3)，条带示2种带型，一30Obp之间有种带型示3条条带，在100一Zobo1条条带。另1种带型示2条条带条带，300~400Pb有1条条带。39例临床株酶切产物示前一种带型。都柏林念珠产物示后一种带型。

硕士研究生学位论文12345678图3.标准株;泳道3:念珠菌标准株;酶切产物8%聚丙烯酚胺凝胶垂直电泳图。泳道1:阴性对照;泳道:2都柏林念珠菌都柏林念珠菌临床株:泳道4:DNA泳道6、7:白念珠菌临床株;泳道8:marker(100，200，300，40。，500，600bp):泳道5:白DNAmarker(100，200，300


本文编号：3262550