利用SSH对犬小孢子菌在不同诱导底物表达差异基因的研究

发布时间：2021-08-10 01:57

　　目的:犬小孢子菌病是由亲动物性真菌-犬小孢子菌感染人类所致的头皮、头发、光滑皮肤及甲的传染性皮肤病。随着生活水平不断提高人们的生活习惯随之改变,猫狗等宠物与人类的密切接触导致犬小孢子菌病的发病率逐年增加,特别是犬小孢子菌所致脓癣的病例数急剧增加。有关该病的发病机制,近年多数学者明确提出蛋白酶在皮肤癣菌病中具有一定致病作用,然而蛋白酶与脓癣的相关性及在脓癣中发病机制的研究尚无报道。由于脓癣几乎发生于学龄前儿童头皮处,特殊的发病年龄与部位,提醒了本研究的设想,即儿童头皮组织在犬小孢子菌所致脓癣的发病中存在了某种特殊的致病因子,该因子是否就是文献所报道具有致病作用的蛋白酶尚不清楚。因而,本研究设想以儿童头皮组织诱导底物为tester,儿童光滑皮肤组织诱导底物为driver1,成人头皮组织为诱导底物driver2,应用抑制消减杂交技术（SSH）分别比较犬小孢子菌在tester与driver1,tester与driver2培养中表达的差异基因,再与genebank比对,明确该些差异基因的功能,从而探讨犬小孢子菌在脓癣中的发病机制,也为将来犬小孢子菌所致脓癣的防治及新药作用靶位的开发研究做出一些探... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

抑制消减杂交流程图

犬小孢子菌米饭培养基中大分生孢子棉兰染色10×40

呈乳白色膜样结构，底部菌丝团呈絮状。在不含皮肤组织的阴性培养基上生长不良，无液气面的膜样结构，但底部见微量的菌丝团（见图 3）。图3 蛋白酶诱导培养基的培养结果1左为无皮肤组织的培养基的培养结果；1右为 driver2诱导培养基的培养结果；2为 driver1诱导培养基的培养结果；3为 tester诱导培养基的培养结果。3．犬小孢子菌总 RNA提取用1%的琼脂糖凝胶电泳检测所提取的总RNA（见图4），分别为28S，18S， 5S三条带，其中 28S与 18S条带的亮度比值为 2:1， 5S的亮度较弱，表明所提取的总RNA质量完整，降解极少。用紫外分光光度计检测显示总RNAOD260/ OD2 80>1.9,表明所提取的总 RNA纯度较高


本文编号：3333221