GM-CSF通过JNK/c-Jun通路介导成纤维细胞MMP2/MMP9的表达
发布时间：2021-08-10 10:52
目的探讨粒细胞单核巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对人皮肤成纤维细胞表达基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9（MMP2/MMP9）的影响及其相关机制。方法 ELISA法和明胶酶谱检测不同GM-CSF浓度（0、10、50、100和500 ng/m L）刺激下成纤维细胞上清液内MMP2/MMP9的浓度及活性;Western blotting和real-time PCR分别用于检测GM-CSF或SP600125+GM-CSF处理组成纤维细胞后MMP2/MMP9/JNK/p-JNK/c-Jun/p-c-Jun的蛋白水平以及MMP2/MMP9的mRNA水平;ELISA法检测GM-CSF或SP600125+GM-CSF处理成纤维细胞不同时间（6、12、24和48 h）后细胞上清内MMP2/MMP9的浓度。结果 GM-CSF可以显著诱导人皮肤成纤维细胞MMP2/MMP9的表达与分泌（P<0.05）,且分泌的MMP2/MMP9浓度及活性与GM-CSF浓度呈正相关;GM-CSF处理成纤维细胞后,JNK及c-Jun蛋白的磷酸化水平和MMP2/MMP9的mRNA水平均高于对照组（P<0.05）...
【文章来源】：上海交通大学学报(医学版). 2015,35(07)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
不同浓度GM-CSF刺激下成纤维细胞上清内MMP2和MMP9的浓度
?赴鸐MP2/MMP9的表达GM-CSF浓度(0、10、50、100和500ng/mL)刺激成纤维细胞24h，通过ELISA法检测细胞上清内MMP2/MMP9浓度，明胶酶谱法检测MMP2/MMP9活性。不同GM-CSF浓度(0、10、50、100和500ng/mL)处理细胞后，MMP2及MMP9的浓度及活性均较0ng/mL增强;随GM-CSF浓度增高，MMP2/MMP9在成纤维细胞培养上清液内的浓度及活性呈剂量依赖性增加(图1、2)。图1不同浓度GM-CSF刺激下成纤维细胞上清内MMP2和MMP9的浓度Fig1ConcentrationsofMMP2andMMP9insupernatantoffibroblaststreatedbyCM-CSFofdifferentconcentrations图2不同浓度GM-CSF刺激下成纤维细胞上清内MMP2和MMP9的活性Fig2ActivityofMMP2andMMP9insupernatantoffibroblaststreatedbyCM-CSFofdifferentconcentrations2．1．2MMP2/MMP9的蛋白表达量用100ng/mL浓度的GM-CSF刺激人皮肤成纤维细胞，24h后细胞内MMP2/MMP9的相对蛋白表达量与空白对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)(图3)。2．2GM-CSF促进成纤维细胞内c-Jun和JNK蛋白的磷酸化且JNK是AP-1的上游信号GM-CSF处理后的成纤维细胞内磷酸化JNK蛋白及磷酸化c-Jun蛋白的表达较空白对照组增强，差异有统计学意义(P＜0.05)，SP600125+GM-CSF组c-Jun的磷酸化被显著抑制，与GM-CSF组相比差异有统计学意义(P＜0.05)(图4)。注:A．Westernblotting法检测MMP2/MMP9蛋白表达;B．MMP2蛋白相对表达量;C．MMP9蛋白相对表达量。1．空白对照组;2．100ng/mLGM-CSF组。①P＜0.05与空白对照组比较。图3GM-CSF处理后成纤维细胞MMP2和MMP9蛋白的表达Fig3ProteinexpressionsofMMP2andMMP9offibroblaststreatedbyCM-CSF注:A．Westernblotting法检测JNK蛋白表达;B．Westernblotting法检测c-Jun蛋白表达;C．磷酸化JNK蛋白相对表达量;D．磷?
白表达量与空白对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)(图3)。2．2GM-CSF促进成纤维细胞内c-Jun和JNK蛋白的磷酸化且JNK是AP-1的上游信号GM-CSF处理后的成纤维细胞内磷酸化JNK蛋白及磷酸化c-Jun蛋白的表达较空白对照组增强，差异有统计学意义(P＜0.05)，SP600125+GM-CSF组c-Jun的磷酸化被显著抑制，与GM-CSF组相比差异有统计学意义(P＜0.05)(图4)。注:A．Westernblotting法检测MMP2/MMP9蛋白表达;B．MMP2蛋白相对表达量;C．MMP9蛋白相对表达量。1．空白对照组;2．100ng/mLGM-CSF组。①P＜0.05与空白对照组比较。图3GM-CSF处理后成纤维细胞MMP2和MMP9蛋白的表达Fig3ProteinexpressionsofMMP2andMMP9offibroblaststreatedbyCM-CSF注:A．Westernblotting法检测JNK蛋白表达;B．Westernblotting法检测c-Jun蛋白表达;C．磷酸化JNK蛋白相对表达量;D．磷酸化c-Jun蛋白相对表达量。1．空白对照组;2．GM-CSF组;3．SP600125+GM-CSF组。①P＜0.05与空白对照组比较;②P＜0.05与GM-CSF组比较。图4GM-CSF处理后成纤维细胞p-JNK和p-c-Jun的表达Fig4Expressionsofp-JNKandp-c-JunoffibroblaststreatedbyCM-CSF·936·
【参考文献】：
期刊论文
[1]ERK通路在单核巨噬细胞集落刺激因子调控成纤维细胞血管内皮生长因子表达中的作用[J]. 李晓光,方勇,姚敏,胡孝辉,徐鹏,俞为荣. 上海交通大学学报(医学版). 2010(11)
本文编号：3333926
【文章来源】：上海交通大学学报(医学版). 2015,35(07)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
不同浓度GM-CSF刺激下成纤维细胞上清内MMP2和MMP9的浓度
?赴鸐MP2/MMP9的表达GM-CSF浓度(0、10、50、100和500ng/mL)刺激成纤维细胞24h，通过ELISA法检测细胞上清内MMP2/MMP9浓度，明胶酶谱法检测MMP2/MMP9活性。不同GM-CSF浓度(0、10、50、100和500ng/mL)处理细胞后，MMP2及MMP9的浓度及活性均较0ng/mL增强;随GM-CSF浓度增高，MMP2/MMP9在成纤维细胞培养上清液内的浓度及活性呈剂量依赖性增加(图1、2)。图1不同浓度GM-CSF刺激下成纤维细胞上清内MMP2和MMP9的浓度Fig1ConcentrationsofMMP2andMMP9insupernatantoffibroblaststreatedbyCM-CSFofdifferentconcentrations图2不同浓度GM-CSF刺激下成纤维细胞上清内MMP2和MMP9的活性Fig2ActivityofMMP2andMMP9insupernatantoffibroblaststreatedbyCM-CSFofdifferentconcentrations2．1．2MMP2/MMP9的蛋白表达量用100ng/mL浓度的GM-CSF刺激人皮肤成纤维细胞，24h后细胞内MMP2/MMP9的相对蛋白表达量与空白对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)(图3)。2．2GM-CSF促进成纤维细胞内c-Jun和JNK蛋白的磷酸化且JNK是AP-1的上游信号GM-CSF处理后的成纤维细胞内磷酸化JNK蛋白及磷酸化c-Jun蛋白的表达较空白对照组增强，差异有统计学意义(P＜0.05)，SP600125+GM-CSF组c-Jun的磷酸化被显著抑制，与GM-CSF组相比差异有统计学意义(P＜0.05)(图4)。注:A．Westernblotting法检测MMP2/MMP9蛋白表达;B．MMP2蛋白相对表达量;C．MMP9蛋白相对表达量。1．空白对照组;2．100ng/mLGM-CSF组。①P＜0.05与空白对照组比较。图3GM-CSF处理后成纤维细胞MMP2和MMP9蛋白的表达Fig3ProteinexpressionsofMMP2andMMP9offibroblaststreatedbyCM-CSF注:A．Westernblotting法检测JNK蛋白表达;B．Westernblotting法检测c-Jun蛋白表达;C．磷酸化JNK蛋白相对表达量;D．磷?
白表达量与空白对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)(图3)。2．2GM-CSF促进成纤维细胞内c-Jun和JNK蛋白的磷酸化且JNK是AP-1的上游信号GM-CSF处理后的成纤维细胞内磷酸化JNK蛋白及磷酸化c-Jun蛋白的表达较空白对照组增强，差异有统计学意义(P＜0.05)，SP600125+GM-CSF组c-Jun的磷酸化被显著抑制，与GM-CSF组相比差异有统计学意义(P＜0.05)(图4)。注:A．Westernblotting法检测MMP2/MMP9蛋白表达;B．MMP2蛋白相对表达量;C．MMP9蛋白相对表达量。1．空白对照组;2．100ng/mLGM-CSF组。①P＜0.05与空白对照组比较。图3GM-CSF处理后成纤维细胞MMP2和MMP9蛋白的表达Fig3ProteinexpressionsofMMP2andMMP9offibroblaststreatedbyCM-CSF注:A．Westernblotting法检测JNK蛋白表达;B．Westernblotting法检测c-Jun蛋白表达;C．磷酸化JNK蛋白相对表达量;D．磷酸化c-Jun蛋白相对表达量。1．空白对照组;2．GM-CSF组;3．SP600125+GM-CSF组。①P＜0.05与空白对照组比较;②P＜0.05与GM-CSF组比较。图4GM-CSF处理后成纤维细胞p-JNK和p-c-Jun的表达Fig4Expressionsofp-JNKandp-c-JunoffibroblaststreatedbyCM-CSF·936·
【参考文献】：
期刊论文
[1]ERK通路在单核巨噬细胞集落刺激因子调控成纤维细胞血管内皮生长因子表达中的作用[J]. 李晓光,方勇,姚敏,胡孝辉,徐鹏,俞为荣. 上海交通大学学报(医学版). 2010(11)
本文编号：3333926
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