三七总皂苷和角质形成细胞来源的外泌体对人表皮黑素细胞的作用

发布时间：2025-01-07 02:33

　　目的:(1)观察中药单体三七总皂苷(PNS)对黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性、黑素合成、自噬水平的影响。(2)利用高通量测序技术对两种外泌体的miRNA表达谱进行分析。(3)应用角质形成细胞和成纤维细胞释放的外泌体干预黑素细胞,观察两种干预条件下外泌体的内化过程、黑素细胞的增殖情况、酪氨酸酶活性、黑素合成的差异。方法:(1)获取来源于包皮的表皮黑素细胞悬液,传代时进行差别胰酶处理,获得较为纯净的黑素细胞,接种在培养板中。分别用浓度为0μg/ml、10μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml、120μg/ml的PNS处理黑素细胞,光镜下观察黑素细胞的生长情况和形态,孵育24小时和48小时分别用多巴氧化法检测酪氨酸酶活性、氢氧化钠法检测黑素含量、CCK-8法检测细胞增殖率。选取中间浓度(60μg/ml),借助自噬水平检测试剂盒检测黑素细胞的自噬水平。(2)培养的角质形成细胞和成纤维细胞用富集法换液,收集培养基,用exo Easy Maxi Kit试剂盒提取培养基中的外泌体,利用高通量测序,分析两种外泌体的miRNA表达谱,主要关注miRNA差异表达分析,对差异表达的miRN...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1差别胰酶处理获取较为纯净的黑素细胞

图1差别胰酶处理获取较为纯净的黑素细胞。A：原代培养的细胞，黑素细胞、成纤维细胞、角质形成细胞混杂（100×）；B：差别胰酶处理后获得的二代细胞，绝大多数细胞是黑素细胞，几乎没有角质形成细胞和成纤维细胞。3.2实验组和对照组黑素细胞形态学观察差别胰酶消化法获得的较为纯净的黑....

图3三七总皂苷对黑素细胞增殖率的影响

三七总皂苷和角质形成细胞来源的外泌体对人表皮黑素细胞的作用实验一处理组，细胞增殖迅速，有成簇生长的趋势，细胞普遍多树突化（100×）。F：120μg/ml药液处理组，细胞增殖较低浓度处理组低，细胞密度和对照组相似，黑素细胞有3-4个树突，树突更为伸展、细长。3.3实验组和对....

图4三七总皂苷对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响

实验一三七总皂苷和角质形成细胞来源的外泌体对人表皮黑素细胞的作用90μg/ml、120μg/ml）孵育，孵育24小时后检测酪氨酸酶活性，获得的数据与细胞增殖率的变化曲线相一致。结果显示，与普通培养基培养的对照组相比，药液处理明显促进了黑素细胞酪氨酸酶活性，并且这种促进作用随....

图5三七总皂苷对黑素细胞黑素含量的影响

图5三七总皂苷对黑素细胞黑素含量的影响。实验组黑素细胞黑素含量明显高于对照组，并且黑素含量随着给药剂量增加呈上升趋势，在药物浓度60μg/ml时达到峰值。随后黑素含量随药物浓度增加呈现下降趋势。3.6实验组和对照组黑素细胞自噬水平的观察较为纯净的黑素细胞以5000细....

本文编号：4024364