Hog1p基因对新生隐球菌不同变种毒力影响的初步研究

发布时间：2017-06-30 00:14

  本文关键词：Hog1p基因对新生隐球菌不同变种毒力影响的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：新生隐球菌是一种在全球范围分布的致病真菌病原体。大部分病例报道感染菌株主要以新生隐球菌新生变种为主,新生隐球菌格特变种(又叫格特隐球菌)次之,但近年来格特隐球菌致病报道有逐渐增多的趋势。作为一种重要的病原真菌,新生隐球菌多感染免疫功能低下的患者。在我国,隐球菌病还是以非AIDS人群为主,但伴发于AIDS的病例报道也在逐年增多。 目前研究比较多的新生隐球菌的致病因子包括37℃生长、黑素、荚膜、胞外蛋白酶等,然而我们对新生隐球菌的具体致病机制的了解仍然有限。新生隐球菌要侵入宿主并在宿主中生存和繁殖必须要适应宿主环境的高渗压力。在所有致病真菌中,MAPK通路的致病机制已经在白念珠菌中得到最详细的描述,可能是由于其介导白念珠菌感染中关键的形态学变化：酵母相向菌丝相的转换。近来,越来越多的证据表明,新生隐球菌的MAPK通路与酿酒酵母菌和白念珠菌的MAPK通路相似,但同时具备自身的特点。因此我们推测MAPK通路中的hogl蛋白也可能在新生隐球菌的感染致病中扮演了重要角色。目前几乎所用HOG-MAPK通路的研究都集中于新生隐球菌血清A型菌株,而本实验我们将主要通过对hoglp的敲除与回复,探索其在格特隐球菌中毒力调控中的作用,并尝试找出该基因在新生隐球菌血清A型和B型菌株毒力调控中的差异。 实验中,我们分别敲除新生隐球菌比利时标准株(BLS71,血清A型)和临床分离株(CZ2012,血清B型)的hoglp基因构建缺陷株,再将hoglp基因重新整合到缺陷株中获得重建株。然后比较原始株、缺陷株和重建株三种不同菌株对体外毒力因子如压力应激敏感性、荚膜和黑素生成、尿素酶活性及抗真菌药物敏感性的差异；选用健康C57BL/6雌性小鼠,在正常免疫情况下和腹腔注射环磷酰胺进行免疫抑制情况下,通过尾静脉注射菌悬液的方法分别建立新生隐球菌系统感染模型。分别在感染后24h和72h后,取出组织,匀浆,分离菌株进行培养,观察各组小鼠主要脏器在感染早期的感染情况,记录小鼠生存时间,进行生存分析,从而比较免疫状态和菌株hoglp基因对感染小鼠生存时间的影响。结果发现hoglp缺陷株荚膜和黑素生成减少,对两性霉素B和唑类药物敏感性明显增高,早期小鼠主要脏器均有隐球菌感染,hoglp缺陷株感染小鼠和免疫正常小鼠生存时间明显延长,说明敲除hoglp基因后的缺陷株的毒力减弱,小鼠被免疫抑制后更容易受新生隐球菌感染,但对压力应激敏感性未发现显著差异。因此,我们推断hoglp对新生隐球菌的毒力的影响至关重要,HOG-MAPK通路可以作为抗真菌药的潜在作用靶点。
【关键词】：新生隐球菌 Hog1p基因 毒力 MAPK
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R756
【目录】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 中英文缩略词对照表8-9
• 第一部分、新生隐球菌hog1p基因的克隆、敲除、重建及表达载体的构建9-20
• 前言9-10
• 一、材料和方法10-13
• 二、结果13-16
• 四、讨论16-18
• 参考文献18-20
• 第二部分、Hog1p基因对新生隐球菌毒力的影响-毒力因子和动物模型研究20-48
• 前言20-21
• 一、材料和方法21-22
• 二、实验方法22-27
• 三、结果27-42
• 四、讨论42-45
• 参考文献45-48
• 全文总结48-49
• 综述49-57
• 参考文献54-57
• 硕士在读期间发表文章和科研工作情况57-58
• 致谢58

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 饶玉春;丁正中;陈析丰;曾大力;马伯军;顾志敏;;稻曲病菌UvHog1基因的克隆及表达分析[J];中国水稻科学;2014年01期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 王莎;构巢曲霉高亲和性钙离子吸收系统参与生长发育调控的机制研究[D];南京师范大学;2013年

2 李平;甘露糖受体MR参与隐球菌免疫逃逸及S100A10促进隐球菌穿过血脑屏障的机制研究[D];第二军医大学;2013年

3 周洁;新生隐球菌对小鼠小胶质细胞氧化磷酸化作用及凋亡的影响[D];第二军医大学;2013年

4 侯彬彬;组氨酸激酶DRK1在申克孢子丝菌双相转换及致病性形成中的作用及黄芪抗小鼠孢子丝菌感染机制的初探[D];大连医科大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 丁文婷;β-arrestin2及内质网应激在隐脑患者发病机制中的探讨[D];河北医科大学;2013年

2 王云灿;Th1-Th2免疫应答系统在隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中的表达[D];河北医科大学;2013年

3 黄英子;冰酒发酵过程中酵母菌的多样性及动态变化研究[D];西北农林科技大学;2013年

4 贺婷;新型隐球菌感染临床分布及其特征分析[D];重庆医科大学;2013年

5 魏旺丽;DJ-1基因在肺癌中的作用及其相互作用蛋白质分析[D];中南大学;2013年

6 褚小静;黄瓜枯萎病菌磷脂酶C4基因的克隆与功能分析[D];山东农业大学;2013年

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本文编号：499883