ADMA对人皮肤成纤维细胞衰老的作用及机制研究

发布时间：2017-06-30 14:06

  本文关键词：ADMA对人皮肤成纤维细胞衰老的作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 研究非对称性二甲基精氨酸(asymmetrical dimethylarginine, ADMA)对人皮肤成纤维细胞(Human skin fibroblasts, HSF)衰老的影响及其可能机制。 方法： 1.用高效液相色谱(HPLC)法测定自然衰老和光老化皮肤组织和成纤维细胞中ADMA的浓度。 2.原代培养人皮肤成纤维细胞,MTT比色法评价ADMA对HSF增殖的影响,确定最佳药物处理浓度。 3.不同浓度ADMA(10,30,501μM)作用于HSF,48小时后,用p-半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老相关p-半乳糖苷酶活性,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)浓度,免疫印迹法(western-bolt)检测磷酸化p38MAPK,衰老相关蛋白P16、MMP-1的改变。 4.预先加入P38抑制剂SB203580(10μM)或抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)(10μM)1小时后,再加入ADMA(50μM)处理,上述同样的方法检测以上指标。 结果： 1.年老组皮肤组织和成纤维细胞中ADMA含量均明显高于儿童组(P0.05),同一人中曝光部位皮肤组织中ADMA含量明显高于非曝光部位(P0.05),UVA照射后HSF中ADMA的含量明显升高(P0.05)。 2. ADMA能抑制人皮肤成纤维细胞的增殖,且随浓度增加,抑制能力也相应增强,IC50=51.47±1.013μM。 3.不同浓度ADMA(10,30,50μM)处理HSF48小时后,细胞密度减少、细胞变大变圆,p-半乳糖苷酶染色率、衰老相关蛋白P16均随ADMA浓度的增加而增加(P0.05),细胞出现衰老表型。 4.不同浓度ADMA(10,30,50μM)处理HSF后,ROS水平随浓度增加而增加,磷酸化p38MAPK,MMP-1蛋白亦随浓度逐渐增加(P0.05)。 5.P38抑制剂SB203580(10μM)能显著下降ADMA所致的p-半乳糖苷酶染色率、P16蛋白及MMP-1蛋白的升高；抗氧化剂NAC(10μM)亦能明显下降ADMA所致的p-半乳糖苷酶染色率、P16蛋白、ROS浓度、磷酸化p38MAPK及MMP-1蛋白的升高。 结论： 1.自然衰老和光老化皮肤组织及成纤维细胞中ADMA的含量显著上升,ADMA在皮肤衰老过程中起重要作用； 2. ADMA能通过促进ROS的产生、激活p38MAPK磷酸化、从而促进MMP1的生成而诱导人皮肤成纤维细胞的衰老。
【关键词】：ADMA 皮肤衰老 ROS p38MAPK MMP-1
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R751
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• ~.略语表9-10
• 前言10-13
• 第一章 材料和方法13-25
• 1.1 研究对象13
• 1.2 主要试剂盒仪器13-15
• 1.3 主要试剂配制15-18
• 1.4 实验方法18-24
• 1.5 统计分析24-25
• 第二章 结果25-33
• 2.1 自然衰老皮肤组织及成纤维细胞中ADMA含量的变化25
• 2.2 光老化皮肤组织及成纤维细胞中ADMA含量的变化25-26
• 2.3 ADMA对HSF细胞增殖的影响26-27
• 2.4 ADMA对HSF细胞衰老的影响27-28
• 2.5 ADMA对HSF细胞ROS、磷酸化P-38MAPK、MMP-1的影响28-29
• 2.6 加入P38抑制剂SB203580或抗氧化剂NAC后磷酸化P-38MAPK,P-MAPKAPK2的改变并确定最适合的抑制剂浓度29-30
• 2.7 加入P38抑制剂SB203580或抗氧化剂NAC后ROS、磷酸化P-38MAPK,P-MAPKAPK2,MMP-1的变化30-31
• 2.8 加入P38抑制剂SB203580或抗氧化剂NAC后衰老指标的变化31-33
• 第三章 讨论33-36
• 第四章 结论36-37
• 参考文献37-42
• 综述42-57
• 参考文献51-57
• 致谢57-58
• 攻读学位期间主要的研究成果58

【参考文献】

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本文编号：502166