CD147与GLUT1在人恶性黑素瘤细胞中相互作用的研究

发布时间：2017-07-30 07:27

  本文关键词：CD147与GLUT1在人恶性黑素瘤细胞中相互作用的研究

  更多相关文章： CD147 GLUT1 糖酵解 恶性黑素瘤 葡萄糖摄取

【摘要】：研究目的： CD147是免疫球蛋白超家族成员中的一种跨膜糖蛋白,本实验室前期研究表明CD147能促进恶性黑素瘤增殖、侵袭、转移和血管新生,但具体机制尚不完全清楚。葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter member1GLUT1)是一种分布在细胞膜的跨膜糖蛋白,介导葡萄糖在细胞膜上的转运,在细胞摄取利用葡萄糖过程中发挥重要作用。本研究拟通过对CD147与GLUT1在恶性黑素瘤细胞株A375中及人恶性黑色素瘤组织中相互作用的研究,明确其作用位点,在细胞中对于葡萄糖摄取的影响,为进一步明确恶性黑素瘤发生发展的分子机制提供理论依据。 研究方法： 1.用组织芯片免疫组化技术明确CD147、GLUT1在恶性黑素瘤组织中的表达及二者相关性。 2.运用细胞免疫荧光技术观察A375细胞中CD147与GLUT1的定位。 3.构建GLUT1与CD147全长及缺失突变体的真核表达载体。 4.运用免疫共沉淀技术验证CD147与GLUT1相互结合,共转染GLUT1质粒及CD147的不同缺失突变体质粒至工具细胞293FT,分析CD147与GLUT1相互结合的位点。 5.分别用A375及A375稳定干扰CD147细胞行裸鼠皮下成瘤。运用micro PET/CT成像技术检测两组裸鼠葡萄糖摄取的变化。然后用免疫组化方法分别检测移植瘤中CD147与GLUT1的表达。 研究结果： 1.免疫组化检测出GLUT1与CD147在人恶性黑素瘤中均有表达且二者正相关,具有统计学意义(P0.05)。 2.细胞免疫荧光发现A375细胞中CD147与GLUT1在细胞膜存在共定位现象。 3.成功构建了GLUT1与CD147全长及缺失突变体的真核表达载体。 4.Co-IP验证GLUT1与CD147相互作用的结果,并进一步证实CD147与GLUT1相互结合的区段位于CD147胞外第二个Ig样结构域。5.CD147干扰的A375细胞与正常A375细胞在裸鼠皮下成瘤。micro PET/CT扫描显示干扰CD147后裸鼠裸鼠移植瘤摄取葡萄糖明显下(P0.05)。且免疫组化结果证实,干扰CD147组的移植瘤中,CD147与GLUT1的表达明显下降。 结论 CD147分子不仅能与GLUT1相互作用,CD147与GLUT1相互结合的区段位于CD147胞外第二个IgG样结构域,且CD147能正调节恶性黑素瘤细胞葡萄糖转运过程,为CD147参与恶性黑素瘤的糖酵解过程提供了进一步的理论依据。
【关键词】：CD147 GLUT1 糖酵解 恶性黑素瘤 葡萄糖摄取
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• ~.略语表10-11
• 前言11-14
• 第一章 材料与方法14-29
• 1.1 材料14-20
• 1.1.1 主要试剂14-16
• 1.1.2 主要耗材16
• 1.1.3 主要仪器16-18
• 1.1.4 主要自制溶液配方18-20
• 1.1.5 细胞株20
• 1.2 方法20-28
• 1.2.1 免疫组化20-21
• 1.2.2 裸鼠成瘤模型的建立21
• 1.2.3 microPET/CT扫描21
• 1.2.4 分子克隆与PCR21-25
• 1.2.5 细胞培养25
• 1.2.6 细胞免疫荧光25-26
• 1.2.7 免疫共沉淀26-27
• 1.2.8 Western Blot27-28
• 1.3 免疫组化评分标准28
• 1.4 统计学分析方法28-29
• 第二章 结果29-37
• 2.1 CD147与GLUT1在恶性黑素瘤组织微阵列芯片中的表达的相关性29-32
• 2.2 免疫荧光检测CD147与GLUT1共定位32
• 2.3 CD147与GLUT-1相互作用32-34
• 2.4 荷瘤裸鼠肿瘤组织~(18)F-FDG摄取的扫描34-37
• 第三章 讨论37-40
• 结论40-41
• 参考文献41-43
• 综述43-52
• 参考文献49-52
• 攻读硕士期间研究成果52-53
• 致谢53

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本文编号：593077