糖皮质激素持续使用导致银屑病加重的机理探讨和IL-20SNP rs1713239的功能研究

发布时间：2017-08-08 03:04

  本文关键词：糖皮质激素持续使用导致银屑病加重的机理探讨和IL-20SNP rs1713239的功能研究

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【摘要】：第一部分糖皮质激素持续使用导致银屑病加重的机理探讨 目的：银屑病是一种常见的炎症性皮肤病，糖皮质激素一直作为银屑病治疗的一线治疗，但是临床发现患者长期持续使用糖皮质激素会出现疾病复发甚至加重现象。真皮γδ T细胞在银屑病发病中起重要作用。真皮γδ T细胞表面表达CCR6，识别皮肤角质形成细胞表达CCL20趋化迁移至皮肤中发挥作用。本文通过一系列实验研究糖皮质激素联合IL-1β对于皮肤角质形成细胞CCL20的表达及真皮γδ T细胞功能的调节，以此初步探讨糖皮质激素长期持续使用引起疾病加重的机理。 方法：应用地塞米松联合IL-1β刺激人HaCat细胞，通过实时定量PCR法检测细胞CCL20的表达；分离小鼠真皮细胞，体外给予地塞米松联合IL-1β刺激，流式细胞计数检测真皮γδ T细胞中IL-17的表达；给予小鼠涂抹糖皮质激素药膏1个月，比较皮肤中TNF-α, IL-1β，IL-17，CCL20mRNA的表达。 结果：①地塞米松联合IL-1β上调HaCat细胞中CCL20的表达。②地塞米松抑制了IL-β促进真皮γδT细胞表达IL-17的能力。③在单纯使用糖皮质激素的情况下，小鼠皮肤中TNF-α, IL-1β，IL-17mRNA表达下降，，CCL20mRNA表达上调。 结论：糖皮质激素联合IL-1β上调HaCat细胞中CCL20的表达，促进γδT细胞迁移至皮肤中，但同时抑制细胞表达IL-17的能力。 第二部分SNPrs1713239的功能研究 目的：银屑病是一种常见的炎症性皮肤病，由环境因素和遗传背景联合作用诱发疾病。IL-20启动子区存在着一个单核苷酸多态性（single-nucleotide polymorphism, SNP）位点（IL-20-1723C Grs1713239），与感染诱导发病的银屑病有关。本文通过一系列实验研究IL-20SNP rs1713239的功能，以此初步探讨环境因素和遗传背景怎样相关作用促进银屑病的发生发展。 方法：应用IL-1β，CpG-A或LPS刺激人原代角质形成细胞和HaCat细胞，通过实时定量PCR法，ELISA和流式细胞技术检测细胞表达IL-20的能力；体外构建携带该SNP不同等位基因的萤光素酶报告基因质粒,分别转染HaCat和HEK293t细胞，应用IL-1β，CpG-A或LPS刺激细胞，比较不同等位基因对启动子活性的调节及对不同刺激物的反应；收集36名寻常斑块型银屑病患者，根据该SNP位点携带的等位基因分组，比较两组间皮损处皮肤检测IL-20mRNA和蛋白水平的表达情况。 结果：①细菌核酸成分可以促进角质形成细胞IL-20表达。②IL-20-1723位点SNP具有转录调节功能，该位点携带不同等位基因的荧光素酶报告基因的荧光强度有统计学差异，G等位基因较C等位基因引起更强的报告基因表达。③在IL-1β和CpG-A刺激下，携带等位基因G的荧光强度较刺激前明显增强，携带C等位基因的荧光强度在刺激前后无明显变化。LPS刺激后两个等位基因的荧光强度均无统计学差异。④NF-kB P65亚单位不参与该位点等位基因对于启动子活性的转录调节作用。⑤携带等位基因G的患者皮损处细胞受到CpG-A或IL-1β刺激后IL-20表达增高，而CC基因型患者接受相同刺激后IL-20表达无明显变化。 结论：细菌DNA成分上调皮肤角质形成细胞中IL-20的表达，SNPrs1713239不仅可以单独调节IL-20启动子活性，同时其与细菌成分具有协同调节IL-20启动子活性的作用。
【关键词】：银屑病 糖皮质激素 IL-1β CCL20 γδT细胞 IL 17 银屑病 感染 IL-20 SNP
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文缩略语11-13
• 第一部分13-33
• 引言13-16
• 材料与方法16-24
• 结果24-30
• 讨论30-32
• 结论32-33
• 第二部分33-68
• 引言33-35
• 材料与方法35-53
• 结果53-65
• 讨论65-67
• 结论67-68
• 参考文献68-77
• 致谢77-79
• 已发表论文79

【参考文献】

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1 Ruaidhrí J. Carmody;;Nuclear Factor-κB:Activation and Regulation during Toll-Like Receptor Signaling[J];Cellular & Molecular Immunology;2007年01期

2 朱瑾,吴军,郑峻松;CCL趋化因子与变应性鼻炎[J];免疫学杂志;2002年S1期

本文编号：637901