寻常型银屑病患者外周血调节性T细胞检测及复方甘草酸苷对T细胞相关细胞因子表达的影响

发布时间：2017-08-20 07:27

  本文关键词：寻常型银屑病患者外周血调节性T细胞检测及复方甘草酸苷对T细胞相关细胞因子表达的影响

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【摘要】：目的通过检测寻常型银屑病外周血CD4+CD25+CD127-/CD4+调节性T细胞(Treg)的表达和复方甘草酸苷(CG)对永生化人角质形成细胞株(HaCaT)增殖活性及T细胞相关因子的影响,探讨Treg在银屑病发病过程中的作用以及CG辅助治疗银屑病的可能机制。方法第一部分:收集30例寻常型银屑病患者外周血(实验组),整理患者资料[包括性别、年龄、病程、皮损面积和严重性指数(PASI评分)、疾病活动性(稳定期、进展期和消退期)],同时抽取30例正常体检人群外周血作为对照组。分别用流式细胞仪检测两组外周血CD4+CD25+CD127-Treg的表达及占CD4+Treg的比例,并分析其与皮损面积和严重程度的相关性。第二部分:采用Ficoll密度梯度离心法分离30例寻常型银屑病患者与30例健康对照者外周血单一核细胞(PBMCs),收取上清液作用于HaCaT细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT法)检测作用前后HaCaT细胞的增殖活性;双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)检测上清液中白介素(IL)-2及IL-4的表达,并与皮损面积和严重程度进行相关性分析。第三部分:不同浓度CG分别作用HaCaT细胞[最终体积比分别为0.05、0.1、0.2(依次设定为低、中、高浓度组)],24h后应用MTT法测定HaCaT细胞增殖活性;ELISA法检测上清液中IL-2及IL-4的表达。结果1.实验组CD4+CD25+CD127-/CD4+Treg随着PASI评分的升高而降低,呈负相关;不同实验组之间比较差异有统计学意义(P0.05)。2.实验组PBMCs作用HaCaT细胞24h后,细胞增殖能力比对照组明显增强(P0.05);进展期与稳定期组PBMCs中IL-2的表达水平比对照组明显增高(P0.05),消退期组与对照组比较差异无统计学意义,不同实验组之间比较差异有统计学意义(P0.05);相对于对照组,进展期组PBMCs中IL-4的表达水平明显降低(P0.05)。3.实验组PBMCs培养上清液中IL-2水平随着PASI评分的升高而增加,呈强正相关(P0.01);IL-4水平与PASI评分呈中度负相关性(P0.05)。4.随着CG浓度的升高,对HaCaT细胞增殖活性的抑制作用明显增强(P0.01);相对于对照组,中、高浓度CG组上清液中IL-2浓度明显下降(P0.01),高浓度CG组IL-4的浓度明显升高(P0.05),其余组IL-2、IL-4分泌水平与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);不同实验组之间比较IL-2水平差异有统计学意义(P0.05)。结论1.寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+CD127-/CD4+Treg与疾病的严重程度和活动性呈强负相关。2.寻常型银屑病患者PBMCs可促进皮肤角质形成细胞增殖。3.寻常型银屑病的发病可能与Th1/Th2细胞相关因子的异常分泌有关,且其分泌水平与该疾病的活动性有一定的相关性。4.CG可能通过调节细胞因子IL-2与IL-4的分泌而抑制皮肤角质形成细胞的增殖。
【关键词】：寻常型银屑病 单一核细胞 HaCaT 细胞 复方甘草酸苷 白介素-2 白介素-4
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 缩略语/符号说明8-13
• 前言13
• 研究现状、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 第一部分 寻常型银屑病外周血CD4~+CD25~+CD127~-/CD4~+Treg的检测17-27
• 1.1 实验对象及材料17-18
• 1.1.1 研究对象17
• 1.1.2 主要试剂17
• 1.1.3 主要仪器17-18
• 1.2 实验方法18-19
• 1.2.1 Ficoll密度梯度离心法分离寻常型银屑病外周血单一核细胞18-19
• 1.2.2 流式细胞术检测寻常型银屑病外周血CD4~+CD25~+CD12~7-/CD4~+Treg19
• 1.3 实验结果19-22
• 1.3.1 30例寻常型银屑病患者的详细资料和数据结果19-20
• 1.3.2 正常对照组与实验组外周血CD4~+CD25~+CD127~-/CD4~+Treg测定结果20-21
• 1.3.3 寻常型银屑病外周血CD4~+CD25~+CD127~-/CD4~+Treg与皮损面积及严重程度的相关性21-22
• 1.3.4 寻常型银屑病外周血CD4~+CD25~+CD127~-/CD4~+Treg与病程的相关性22
• 1.4 讨论22-27
• 第二部分 寻常型银屑病外周血单一核细胞中IL-2和IL-4的表达27-39
• 2.1 实验对象及材料27-28
• 2.1.1 研究对象27
• 2.1.2 主要试剂27
• 2.1.3 主要仪器27-28
• 2.1.4 主要液体配制28
• 2.2 实验方法28-31
• 2.2.1 HaCaT细胞培养与传代28-29
• 2.2.2 细胞的冻存与复苏29
• 2.2.3 HaCaT细胞生长曲线的绘制29
• 2.2.4 Ficoll密度梯度离心法分离寻常型银屑病PBMCs29-30
• 2.2.5 MTT法检测寻常型银屑病PBMCs对HaCaT细胞增殖活性的影响30
• 2.2.6 ELISA法检测寻常型银屑病PBMCs上清液中IL-2、IL-4 的水平30-31
• 2.3 结果31-35
• 2.3.1 正常HaCaT细胞生长曲线结果31-32
• 2.3.2 正常对照组和实验组PBMCs作用HaCaT细胞后的培养结果32-33
• 2.3.3 寻常型银屑病PBMCs上清液对HaCaT细胞增殖活性的影响33
• 2.3.4 寻常型银屑病PBMCs上清液中IL-2、IL-4 的水平33-34
• 2.3.5 寻常型银屑病PBMCs上清液中IL-2、IL-4的水平与皮损面积及严重程度的相关性34-35
• 2.4 讨论35-39
• 第三部分 CG对人角质形成细胞IL-2和IL-4 表达的影响39-47
• 3.1 实验材料39-40
• 3.1.1 主要试剂39
• 3.1.2 主要仪器39-40
• 3.2 实验方法40
• 3.2.1 MTT法检测不同浓度CG对HaCaT细胞增殖活性的影响40
• 3.2.2 ELISA法检测不同浓度CG作用HaCaT细胞IL-2、IL-4 的水平40
• 3.3 实验结果40-42
• 3.3.1 不同浓度CG作用后HaCaT细胞的培养结果40-41
• 3.3.2 不同浓度CG对HaCaT细胞增殖活性的影响41-42
• 3.3.3 不同浓度CG作用HaCaT细胞上清液中IL-2、IL-4 分泌水平42
• 3.4 讨论42-47
• 结论47-48
• 参考文献48-56
• 发表论文和参加科研情况明56-57
• 综述一 CD4~+CD25~+调节性T细胞在银屑病发病中的作用57-64
• 综述一参考文献61-64
• 综述二 CD4~+CD25~+调节性T细胞在自身免疫性疾病中的作用64-76
• 综述二参考文献71-76
• 致谢76-77
• 个人简历77

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本文编号：705334