靶向eEF-2K对黑色素瘤细胞Vemurafenib治疗敏感性的影响及机制研究

发布时间：2017-09-05 15:06

  本文关键词：靶向eEF-2K对黑色素瘤细胞Vemurafenib治疗敏感性的影响及机制研究

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【摘要】：目的:研究真核延伸因子激酶2(eEF-2K)对黑色素瘤细胞存活和增殖能力的影响及靶向eEF-2K对Vemurafenib治疗敏感性的研究。方法:采用分子生物学、细胞生物学和药理学等多种方法检测1)eEF-2K对黑色素瘤细胞存活、增殖能力的影响;2)靶向eEF-2K对黑色素瘤细胞Vemurafenib治疗敏感性的作用及机制研究;3)eEF-2K抑制剂NH125与Vemurafenib协同治疗研究。结果:本研究发现:1)eEF-2K在BRAF V600E突变的黑色素瘤细胞呈高表达。MTT和克隆集落实验表明:eEF-2K可促进黑色素瘤细胞存活、增殖,沉默eEF-2K或NH125处理(eEF-2K的特异性抑制剂)后,黑色素瘤细胞存活和增殖能力明显下降;2)靶向eEF-2K可促进黑色素瘤细胞对Vemurafenib治疗敏感性。用Vemurafenibe分别治疗黑色素瘤Vemurafenibe敏感株和耐药株细胞,蛋白印迹实验表明,Vemurafenib可以明显下调敏感株细胞eEF-2K的活性,而耐药株细胞却没有明显变化;沉默eEF-2K或用NH125处理后,Vemurafenib可明显抑制黑色素瘤细胞存活和增殖,并可促进凋亡蛋白cleaved PARP表达明显增加;COMPUSYN软件分析NH125与Vemurafenib联合使用具有协同作用,协同指数CI1;3)NH125与Vemurafenib协同诱导黑色素瘤细胞凋亡主要通过调控抗凋亡蛋白survivin的表达而实现,表现为两者合用后,survivin表达明显下调,过表达survivin后,凋亡水平得到部分抑制。结论:靶向eEF-2K可促进黑色素瘤细胞对Vemurafenib治疗敏感性,NH125与Vemurafenib具有协同作用,具体机制主要是通过调控抗凋亡蛋白survivin的表达而实现的。我们的研究结果表明,eEF-2K可以作为一个新的潜在的治疗黑色素瘤的靶点,同时这两种药物的组合使用有可能被用作新的逆转黑色素瘤BRAF抑制剂治疗耐药的新策略。
【关键词】：eEF-2K Vemurafenib NH125 黑色素瘤 survivin
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 研究背景8-13
• 1.黑色素瘤简介8
• 2.黑色素瘤发生发展的分子机制8-10
• 3. BRAF抑制剂vemurafenib治疗黑色素瘤的研究进展及耐药性问题10-11
• 4.真核延伸因子2激酶（eEF-2K）与肿瘤相关性11-13
• 材料与方法13-24
• 一、实验材料13-16
• 1. 细胞株13
• 2. 主要试剂13-14
• 3. 实验仪器14-15
• 4.溶液配制15-16
• 二、实验方法16-24
• 1. 细胞培养16
• 2.siRNA和质粒转染16-17
• 3.ATP含量测定17-18
• 4.细胞增殖能力检测18
• 5. 细胞凋亡检测：18
• 6. Western Blot法检测相关蛋白的表达18-20
• 7. 质粒提取实验20-22
• 8. 细胞活力检测22
• 9. 细胞克隆集落形成实验22-23
• 10. 统计学分析23-24
• 实验结果24-38
• 1. eEF-2K影响黑色素瘤细胞的存活和增殖。24-29
• 2. BRAF抑制剂Vemurafenib可抑制敏感黑色素瘤细胞eEF-2K的活性。29-31
• 3. eEF-2K参与黑色素瘤细胞对BRAF抑制剂Vemurafenib治疗抵抗，同时NH125与Vemurafenib合用具有协同作用。31
• 4. 干扰eEF2K或NH125配合Vemurafenib可以明显诱导黑色素瘤细胞凋亡。 .. 2431-35
• 5. Vemurafenib与NH125联合使用, 可以协同抑制黑色素瘤细胞生长、存活主要是通过下调抗凋亡蛋白survivin的表达水平，促进凋亡。35-38
• 讨论38-41
• 参考文献41-48
• 综述48-74
• 参考文献60-74
• 英文缩略词表74-75
• 攻读学位期间发表的论文75-76
• 致谢76-77

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本文编号：798660