microRNA-181b-5p在卡波西肉瘤组织中的表达及对细胞SLK生物学功能的影响

发布时间：2017-09-05 16:07

  本文关键词：microRNA-181b-5p在卡波西肉瘤组织中的表达及对细胞SLK生物学功能的影响

  更多相关文章： miR-181b-5p 卡波氏肉瘤 增殖 迁移 侵袭

【摘要】：目的：探讨microRNA-181b-5p(miR-181b-5p)在卡波西肉瘤组织中与瘤旁组织中的表达差异情况以及临床意义。通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK，，首次研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等一系列生物学功能的影响，为进一步研究miR-181b-5p在卡波西肉瘤发病机制中的作用奠定理论基础。方法：(1）对18对卡波西肉瘤及瘤旁正常冰冻组织行定量PCR检测，比较其差异性；对18例卡波西肉瘤患者的临床资料行流行病学调查统计描述；对18对卡波西肉瘤组织及瘤旁组织中miR-181b-5p的表达量在年龄、性别、病理分型、HIV感染、HHV-8感染、HIV合并HHV-8感染、病程、皮损面积、全身皮损类型的差异性进行统计描述；(2）应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染，通过转染不同浓度的阳性对照测定MTT值确定最佳转染浓度及最佳转染时间，描绘生长曲线；对转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后的卡波西肉瘤细胞株行MTT检测观察细胞增殖曲线；应用流式细胞仪行检测转染48小时后各组细胞凋亡率比较；(3）转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后应用transwell小室24小时后行苏木素染色观察细胞迁移、细胞侵袭生物学特性。结果：定量PCR结果，miR-181b-5p在卡波西肉瘤中表达明显升高，卡波西肉瘤组比瘤旁组miR-181b-5p的表达量高约3.10倍；miR-181b-5p的相对表达量与年龄、性别、HIV感染、HHV-8感染、HIV合并HHV-8双重感染、病程、皮损面积、全身皮损类型无关，差异无统计学意义，但卡波西肉瘤组织斑片期分别和斑块期、结节期表达量有差异性。MTT法检测显示，最佳转染浓度为94ng/L，最佳转染时间为48小时；与阴性对照组比较，miR-181b-5p模拟物组细胞的增殖能力明显上升，（P＜0.01）。miR-181b-5p抑制物组细胞的增殖能力明显下降，（P＜0.01）。miR-181b-5p抑制物阴性对照组细胞的增殖能力无明显变化。流式细胞仪测定SLK细胞转染miR-181b-5p模拟物后凋亡率（5.5±0.6）%，与阴性对照组凋亡率（7.6±0.4）%相比，差异有统计学意义，明显下降（P＜0.05）；miR-181b-5p抑制物组凋亡率（14.8±1.0）%明显增高，有统计学差异（P＜0.05）。Transwell小室迁移实验结果显示，与阴性对照组迁移实验下室面细胞数目（151±11）个相比miR-181b-5p模拟物组（184±9）个，细胞数目明显数量增多，迁移能力均明显提高；miR-181b-5p抑制物组（105±10）个，细胞数目明显数量减少；迁移能力均明显降低；差异有统计学意义。Transwell小室侵袭实验结果显示，与阴性对照组侵袭实验下室面细胞数目（35±6）个相比miR-181b-5p模拟物组（48±5）个，细胞数目明显数量增多，侵袭能力均明显提高；miR-181b-5p抑制物组（23±4）个，细胞数目明显数量减少；侵袭能力均明显降低；差异有统计学意义。且观察到卡波西肉瘤细胞的侵袭能力较弱，需要提高细胞数量后才能观察细胞计数。结论：miR-181b-5p可能参与了卡波西肉瘤的致瘤过程，miR-181b-5p有可能成为潜在的分子诊断指标之一；通过转染miR-181b-5p模拟物/抑制物，发现其对SLK细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移能力均造成一定影响，进一步开展miR-181b-5p生物学特性和其相关靶基因验证的相关研究有十分重要的意义。
【关键词】：miR-181b-5p 卡波氏肉瘤 增殖 迁移 侵袭
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 前言13-18
• 第一部分 miR-181b-5p 在人卡波西肉瘤组织中的表达变化及临床意义18-40
• 1 研究内容与方法18-23
• 1.1 研究对象18-19
• 1.2 内容与方法19-23
• 1.3 质量控制23
• 1.4 统计方法23
• 2 结果23-30
• 3 讨论30-39
• 4 小结39-40
• 第二部分 miR-181b-5p 对于卡波西肉瘤细胞 SLK 细胞增殖和凋亡的影响40-62
• 1 研究内容与方法40-50
• 1.1 研究对象40-41
• 1.2 内容与方法41-49
• 1.3 质量控制49-50
• 1.4 统计分析50
• 2 结果50-54
• 3 讨论54-61
• 4 小结61-62
• 第三部分 miR-181b-5p 对卡波西肉瘤细胞系 SLK 细胞迁移和侵袭的影响62-80
• 1 研究内容与方法62-68
• 1.1 研究对象62
• 1.2 内容与方法62-67
• 1.3 质量控制67-68
• 1.4 统计分析68
• 2 结果68-71
• 3 讨论71-78
• 4 小结78-80
• 结论80-81
• 致谢81-82
• 参考文献82-95
• 附录95-98
• 综述98-104
• 参考文献102-104
• 攻读学位期间获得的学术成果104-105
• 个人简历105-106
• 导师评阅表106

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张树华,阮幼冰,武忠弼,J.N.Kitinya,马云,朱玉红,吕增华;Kaposi肉瘤的组织病理学特征观察[J];中华皮肤科杂志;2005年01期

2 Jong Y Park;James Helm;Domenico Coppola;Donghwa Kim;Mokenge Malafa;Seung Joon Kim;;MicroRNAs in pancreatic ductal adenocarcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2011年07期

本文编号：798937