UVB辐射对人成纤维细胞5-mC和5-hmC水平的影响

发布时间：2017-09-07 21:32

  本文关键词：UVB辐射对人成纤维细胞5-mC和5-hmC水平的影响

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【摘要】：目的：1.探讨UVB辐射对体外培养人成纤维细胞增殖能力的影响。2.探讨UVB辐射对体外培养人成纤维细胞5-甲基胞嘧啶(5-mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)水平的影响。 方法：1.常规体外培养原代人成纤维细胞,将细胞分为两组：空白对照组和UVB处理组(累积剂量50mJ/cm2UVB辐射)；2.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测成纤维细胞增殖情况3.HE染色观察细胞形态学变化；4.免疫组织化学ABC法检测成纤维细胞5-mC和5-hmC表达水平；5.免疫荧光法检测成纤维细胞5-mC和5-hmC表达水平； 结果：1.HE染色观察细胞形态变化：空白对照组的成纤维细胞排列规则,成漩涡状或栅栏状,细胞形态呈长梭形,胞质丰满,胞膜完整,可见核分裂象UVB处理组的成纤维细胞与空白对照组相比,细胞数目明显减少且排列不规则,细胞变得宽大扁平,多数呈现多角形,胞质疏松透明,边界变得不清楚,胞核内颗粒物增多,核分裂象少见。2.MTT检测结果为UVB处理组细胞的吸光度值随时间(第24、48、72、96、120小时5个时间点)升高并不显著,而空白对照组细胞的吸光度值则明显升高；且空白对照组在72h、96h、120h各时间点吸光度值均明显高于UVB照射组(P0.05)。3.免疫组织化学ABC法检测空白对照组5-hmC表达明显低于处理组,而5-mC表达明显高于处理组(P0.05)。4.免疫荧光法检测结果同免疫组织化学ABC法：空白对照组5-hmC表达水平明显低于处理组,而5-mC表达水平明显高于处理组(P0.05) 结论：1.亚毒性剂量(50mJ/cm2)的UVB辐射能明显抑制体外培养人成纤维细胞细胞的增殖能力。2.UVB辐射能下调体外培养人成纤维细胞内5-mC的表达水平,同时上调5-hmC的表达水平。
【关键词】：中波紫外线 DNA甲基化 5-甲基胞嘧啶 5-羟甲基胞嘧啶 人成纤维细胞
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R758.1
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 符号说明9-10
• 1 绪论10-12
• 2 材料和方法12-19
• 2.1 主要仪器及试剂12-14
• 2.1.1 主要仪器12
• 2.1.2 主要试剂及耗材12-13
• 2.1.3 主要相关试剂配制13-14
• 2.2 实验方法及步骤14-18
• 2.2.1 细胞培养14-16
• 2.2.2 MTT法检测UVB对成纤维细胞增殖活力的影响16
• 2.2.3 HE染色法观察细胞形态变化16-17
• 2.2.4 免疫组化(ABC法)检测细胞5-mC和5-hmC的表达17
• 2.2.5 免疫荧光法检测细胞5-mC和5-hmC的表达17-18
• 2.3 统计学方法18-19
• 3 实验结果19-29
• 3.1 原代培养人成纤维细胞光学显微镜下细胞形态19
• 3.2 HE染色法观察空白对照组和UVB照射组细胞形态变化19-21
• 3.3 MTT法检测空白对照组和UVB照射组细胞增殖活力21
• 3.4 免疫组化法ABC法检测两组细胞内5-hmC和5-mC的表达水平21-24
• 3.4.1 免疫组化ABC法测得5-hmC的表达水平22
• 3.4.2 免疫组化ABC法测得5-mC的表达水平22-24
• 3.5 免疫荧光法检测两组细胞内5-mC和5-hmC的表达水平24-27
• 3.5.1 免疫荧光法测得5-mC的表达水平25
• 3.5.2 免疫荧光法测得5-hmC的表达水平25-27
• 3.6 附实验室同期相关研究结果27-29
• 4 讨论29-34
• 4.1 UVB对人成纤维细胞增殖活性的影响29-30
• 4.2 UVB辐射对细胞甲基化水平的影响30-31
• 4.3 甲基化胞嘧啶与5-羟甲基化胞嘧啶31-32
• 4.4 紫外线辐射致DNA甲基化异常的可能机制32-34
• 5 结论34-35
• 参考文献35-39
• 综述39-50
• 参考文献45-50
• 攻读学位期间主要的研究成果50-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 赵书民;李成涛;;DNA甲基化在法医学中的应用前景及其检测方法新进展[J];法医学杂志;2009年04期

2 董玉玮,侯进慧,朱必才,李培青,庞永红;表观遗传学的相关概念和研究进展[J];生物学杂志;2005年01期

3 王宝玺;;皮肤光老化机制及其防治研究进展[J];中华医学杂志;2007年20期

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本文编号：810016