木鳖子对羟基桂皮醛诱导黑色素瘤细胞分化的实验研究

发布时间：2017-09-20 20:29

  本文关键词：木鳖子对羟基桂皮醛诱导黑色素瘤细胞分化的实验研究

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【摘要】：目的：研究从中药木鳖子中提取的九种单体化合物对小鼠黑色素瘤细胞生长的影响，筛选出作用效果最显著的单体化合物；从形态及功能方面观察对羟基桂皮醛诱导B16细胞分化的作用；并从基因及蛋白水平探讨其作用机制，为其作为抗肿瘤新药开发提供参考依据。 方法： 1从不鳖子中提取对羟基桂皮醛、松柏醛、对羟基苯甲醛、3-甲氧基对羟基苯甲醛和ligballinol等九种单体化合物；采用SRB法检测九种单体化合物对B16细胞生长的影响，计算生长抑制率，并在光镜下观察细胞形态变化。 2SRB法检测不同浓度对羟基桂皮醛（2、4、6μg/ml）作用24h、48h、72h后，对B16细胞增殖的抑制作用。 3采用瑞-姬染色法观察不同浓度对羟基桂皮醛（2、4、6μg/ml）作用于B16细胞72h后，对细胞形态的影响。 4比色法检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞48h后，对细胞黑色素含量和酪氨酸酶活性的影响。 5采用生长曲线的方法检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞48h后，对细胞增殖能力的影响。 6采用克隆集落形成试验检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞48h后，对细胞克隆增殖能力的影响。 7采用划痕试验检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞48h后，对细胞迁徙能力的影响。 8采用流式细胞（Flow cytometry, FCM）检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞6h、12h、24h和48h后，对细胞凋亡率以及细胞周期分布的影响。 9采用免疫印迹技术（Western blot）检测MAPK信号转导通路中p-P38、p-JNK和p-ERK1/2在对羟基桂皮醛诱导B16细胞分化过程中的作用。10通过Real time方法检测6μg/ml的对羟基桂皮醛分别作用于B16细胞6h、12h、24h后，分化相关基因c-myc、Tyr、Trp1和Trp2表达的变化。 结果： 1对羟基桂皮醛、松柏醛、对羟基苯甲醛、3-甲氧基对羟基苯甲醛和ligballinol等九种单体化合物对B16细胞的生长有不同程度的抑制作用，其中对羟基桂皮醛的效果最明显，与各组比较，差异具有统计学意义（P0.05）。 2对羟基桂皮醛（2、4、6μg/ml）对B16细胞的增殖有较强的抑制作用，且具有浓度和时间相关性，与对照组相比差异具有统计学意义（P 0.05）。 3Giemsa染色结果显示，2μg/ml对羟基桂皮醛作用72h后，细胞体积增大变成梭形，排列有序，成纤维状生长。随着对羟基桂皮醛药物浓度的增大，细胞出现树突状结构，为典型的细胞分化形态；而对照组细胞大小均匀，生长密集。 4B16细胞经2、4、6μg/ml的对羟基桂皮醛分别作用48时后，随着药物作用浓度的增大，黑色素含量和酪氨酸酶活性增加，且明显高于对照组，差异具有统计学意义（P0.01）。 5B16细胞经6μg/ml的对羟基桂皮醛作用48时后，生长增殖能力降低，且明显低于对照组，差异具有统计学意义（P0.01）。 6B16细胞经6μg/ml的对羟基桂皮醛作用48时后，克隆集落形成能力降低，且明显低于对照组，差异具有统计学意义（P0.01）。 7B16细胞经6μg/ml的对羟基桂皮醛作用48时后，迁徙力降低，且明显低于对照组，差异具有统计学意义（P0.01）。 8FCM分析结果显示，6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞6、12、24、48h后，细胞凋亡率无明显改变，但处于S期、G2/M期细胞减少，G0/G1期细胞明显增加，与对照组相比有显著差异。组间比较差异有显著性（P0.05），各实验组与对照组比较差异有显著性（P0.01）。 9Western blot结果显示，对羟基桂皮醛还可以上调MAPK信号通路中p-P38和下调p-JNK和p-ERK的蛋白表达水平(P0.05)。 10Real time检测结果显示，对羟基桂皮醛可以上调Tyr、Trp1和Trp2和下调c-myc基因的表达水平(P0.05)，进一步证实对羟基桂皮醛是通过上调酪氨酸酶的表达而诱导黑色素瘤细胞黑色素含量的增加，同时下调肿瘤形成相关基因c-myc的表达水平而促进B16细胞的分化。 结论： 1木鳖子九种单体化合物中，第一种单体化合物对羟基桂皮醛的抗肿瘤作用最强，诱导小鼠黑色素瘤B16细胞形态方面的分化。 2对羟基桂皮醛不仅在功能及形态上诱导黑色素瘤细胞的分化，而且可以使细胞的增殖能力、迁徙力降低，，诱导黑色素瘤细胞向正常方向逆转。 3对羟基桂皮醛是通过上调MAPK信号通路中p-P38和p-JNK蛋白的表达而诱导B16细胞的分化。
【关键词】：黑色素瘤 B16细胞 木鳖子 对羟基桂皮醛 细胞分化
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.5;R285
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 引言10-11
• 第一部分 木鳖子提取的九种单体化合物体外抗肿瘤活性的研究11-23
• 前言11
• 材料与方法11-13
• 结果13-15
• 附图15-18
• 附表18-20
• 讨论20
• 小结20-21
• 参考文献21-23
• 第二部分 木鳖子对羟基桂皮醛体外诱导 B16 细胞分化及其机制的实验研究23-51
• 前言23-24
• 材料与方法24-33
• 结果33-36
• 附图36-43
• 附表43-45
• 讨论45-47
• 小结47
• 参考文献47-51
• 结论51-52
• 综述 诱导黑素瘤细胞分化的药物及其分化机制的研究进展52-69
• 参考文献65-69
• 致谢69-70
• 个人简历70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 赵连梅;韩丽娜;单保恩;潘晓明;刘丽华;李晓光;;木鳖子提取物体外抗肿瘤活性的初步研究[J];癌变.畸变.突变;2010年01期

2 赵连梅;韩丽娜;商晓辉;单保恩;;木鳖子醇提物对黑素瘤B16细胞增殖的抑制及其可能机制[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2010年01期

本文编号：890217