PTC124治疗弹性纤维假黄瘤的初步研究

发布时间：2017-09-30 14:06

  本文关键词：PTC124治疗弹性纤维假黄瘤的初步研究

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【摘要】：研究背景与目的 弹性纤维假黄瘤(Pseudoxanthoma elasticum, PXE)，是一种少见的常染色体遗传性疾病，由16号染色体上的ABCC6基因突变引起的，主要累及弹性纤维和结缔组织，造成弹力纤维降解及组织钙化变硬,可侵犯人体多个器官和系统,主要表现为皮肤、眼、心血管系统损害，发病率约为1:50000。迄今为止，共发现ABCC6基因突变近600个。无义突变（nonsense mutation）是指由于某个碱基的改变，使代某种氨基酸的密码子突变为终止密码子，从而使肽链合成提前终止，肽链合成中断。PXE患者中无义突变的比例近40%,其中R1141X占30%，是主要的致病原因之一，目前缺乏有效的治疗手段。 PTC124（Ataluren），是PTC Therapeutics公司生产的小分子药剂，主要通过降低核糖体对早熟终止密码子（Premature Termination codon， PTC）的敏感性，或忽略早熟终止密码子，从而实现对早熟终止密码子的通读（Read-through）。目前PTC124已经应用在治疗遗传性疾病的临床试验中，其中囊性纤维化（CysticFibrosis）已经进入III期临床试验。 本实验通过体外研究，观察PTC124对PXE患者早熟终止密码子的通读作用，为临床治疗提供新的思路和办法。 研究方法 1．体外实验以人HEK293细胞为研究模型 在PCMV6-hABCC6-DDK质粒中建立已知的7种不同的早熟终止密码子突变模型，转染至HEK293细胞， PTC124处理72小时，免异荧光染色法和细胞内ELISA法检测早熟终止密码子的通读效率。 2．体内实验以斑马鱼为研究模型 R1141X是最常见的无义突变，占35%，根据R1141X早熟终止密码子通读后变化的氨基酸序列，在BS/SK-hABCC6质粒中，构建3种可能的错义突变模型，生成相应的mRNA，显微注射入斑马鱼胚胎进行拯救分析实验，观察斑马鱼胚胎的存活率而分析各种错义突变的作用。 结果 1．体外实验以人HEK293细胞为研究模型实验结果 ①PTC124浓度在0-40umol/L时无细胞毒性。②对7种无义突变，PTC124可以提高早熟终止密码子的通读效率，浓度在5umol/L时通读效率最高。③PTC124浓度在5umol/L时，R1164X and R1275X的通读效率最高，8%。④早熟终止密码子的通读效率不仅受药物浓度影响，还受早熟终止密码子后一位氨基酸序列影响，且当+1位置的序列为“C”时最高。 2．体内实验以斑马鱼为研究模型实验结果 ①早熟终止密码子通读后3种可能的错义突变模型，生成相应的mRNA，，可以使斑马鱼胚胎正常发育，存活率分别为WT90.6%,TGG73.4%，TGC92.5%，GGA84%,阳性对照组（注射morpholino、R1141X）存活率29%，阴性对照组（注射standard control morpholino）存活率88%，治疗组与mopholino对照组之间有显著性差异（p0.05）。②3种错义突变模型之间和突变模型与阴性对照组，斑马鱼胚胎存活率无显著性差异（p0.05）。 结论 1． PTC124可以提高早熟终止密码子的通读效率，浓度在5ug/mL时通读效率最高； 2．早熟终止密码子的通读效率不仅受药物浓度影响，还受早熟终止密码子后一位氨基酸序列影响，且当+1位置的序列为“C”时最高； 3．早熟终止密码子通读后3种可能的错义突变，生成相应的mRNA，可以使斑马鱼胚胎正常发育，存活率与对morpholino照组组之间有显著性差异（p0.05）。 4．PTC124对弹性纤维假黄瘤患者有潜在的治疗作用，需要进一步研究
【关键词】：弹性纤维假黄瘤 无义突变 早熟终止密码子通读作用 PTC124斑马鱼补救分析
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R758.5
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 参考文献10-12
• 第一部分 PTC124 对弹性纤维假黄瘤(PXE)无义突变的通读作用12-53
• 前言12
• 材料与方法12-35
• 结果35-46
• 讨论46-50
• 结论50
• 参考文献50-53
• 第二部分 斑马鱼胚胎发育系统检测ABCC6多肽链功能的研究53-64
• 前言53
• 材料与方法53-57
• 结果57-59
• 讨论59-61
• 参考文献61-64
• 全文总论64-66
• 文献综述66-77
• 参考文献71-77
• 攻读学位期间发表文章情况77-78
• 致谢78-79

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 于海云;浦介麟;;抗生素治疗无义突变所致的遗传性疾病[J];心血管病学进展;2013年01期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 陈剑芳;四种新的基因突变导致血友病B分子发病机制研究及通读疗法对无义突变所致血友病治疗的初步研究[D];山西医科大学;2012年

本文编号：948592