匹罗卡品致大鼠癫痫持续状态后海马Puma和CytC的表达变化

发布时间：2017-10-13 00:00

  本文关键词：匹罗卡品致大鼠癫痫持续状态后海马Puma和CytC的表达变化

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【摘要】：目的:癫痫是一种常见病,流行病学调查显示其发病率为5‰~7‰。癫痫发作不仅可引起脑部神经元的坏死或病理性凋亡及神经生物学改变,而且还常引起患者及家属严重的心理障碍。癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)是神经科临床常见的危急重症,常常导致大脑易损区海马组织的损伤,若得不到及时的缓解和治疗,死亡率很高。研究发现Bcl-2蛋白家族中仅具有BH3结构域的P53上调细胞凋亡调控因子Puma(P53 up-regulated modulator of apoptosis,Puma)蛋白在细胞凋亡途径中发挥了重要的作用。而Cyt C在线粒体外膜渗透性增加的情况下可以释放出来,参与内源性线粒体凋亡途径。Puma和Cyt C对SE后海马神经元的损伤机制研究较少,本实验采用匹罗卡品制作SE大鼠动物模型,探讨SE后24小时Cyt C和Puma在海马组织中的表达情况。方法:成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠62只,随机分成实验组(n=54)和对照组(n=8)。实验组先应用硫酸阿托品以拮抗匹罗卡品的外周胆碱能效应,随后通过匹罗卡品腹腔注射制造癫痫模型,根据大鼠是否发生SE将其分为癫痫持续状态组(SE组)和非癫痫持续状态组(非SE组)。24小时后取大鼠海马组织,HE染色观察海马CA1区神经元的数量,TUNEL染色观察海马神经元的损伤情况。采用Western blot方法测定海马组织中Puma的表达,免疫组织化学方法检测海马组织中Cyt C的含量。运用Pearson相关分析法分析Puma和Cyt C表达的相关性。对照组除匹罗卡品用生理盐水代替外,其余所有操作步骤与实验组相同。结果:54只实验组大鼠中未诱导出SE的有12只,归入非SE组。成功诱导出SE的有42只,成功率为77.8%。42只SE大鼠中24h之内死亡14只,死亡率为33.3%,入SE组28只。对照组和非SE组24小时内均未死亡。SE组大鼠海马CA1区HE染色神经元数量(54.75±3.37)与对照组(103.75±2.12)和非SE组(100.67±2.19)相比,显著减少(p0.05)。SE组TUNEL阳性神经元数目(25.14±2.77)与对照组(3.25±2.19)和非SE组(3.33±2.02)相比明显增加(p0.05)。而且可见SE组海马组织Cyt C阳性神经元的含量(14.11±2.38)较对照组(2.88±2.70)和非SE组(4.42±2.19)明显增多(p0.05)。并可见SE组海马组织Puma蛋白的表达(0.439±0.038)较对照组(0.016±0.003)和非SE组(0.249±0.034)明显增多(p0.05)。相关性分析显示SE组Puma蛋白的表达和Tunel染色阳性神经元细胞含量之间存在着相关关系(r=0.891,p0.01);而且,SE组Puma和Cyt C的含量变化具有相关性(r=0.895,P0.01)。结论:大鼠SE后24h海马神经元出现凋亡,而且Puma蛋白的表达和Tunel染色阳性神经元细胞含量之间存在着正相关关系。Puma和Cyt C在SE大鼠海马组织神经元中的表达含量增加,两者的表达水平成正相关。
【关键词】：癫痫持续状态 匹罗卡品 Puma CytC 大鼠
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.1
【目录】：

• 摘要5-7
• abstract7-11
• 中英文对照11-12
• 第一章：绪论12-16
• 第二章：材料与方法16-32
• 2.1 实验材料16-21
• 2.1.1 实验动物16
• 2.1.2 实验仪器和设备16-17
• 2.1.3 药品和试剂17-19
• 2.1.4 试剂制备19-21
• 2.2 实验方法21-31
• 2.2.1 制作动物模型21-22
• 2.2.2 制作动物标本22-23
• 2.2.3 HE染色23-25
• 2.2.4 TUNEL染色25-26
• 2.2.5 免疫组化染色检测CytC的表达26-27
• 2.2.6 western blot实验检测Puma的表达27-31
• 2.3 统计学分析方法31-32
• 第三章：结果32-51
• 3.1 造模后各组大鼠的行为表现32-33
• 3.2 大鼠癫痫模型的结果分析33-40
• 3.2.1 大鼠SE模型成功率和死亡率的结果33-37
• 3.2.2 大鼠有无癫痫发作和发作级别的结果37-38
• 3.2.3 大鼠癫痫模型的潜伏期和发作时间的结果38-40
• 3.3 HE染色结果分析40-42
• 3.4 TUNEL染色结果分析42-45
• 3.5 免疫组织化学染色结果分析45-48
• 3.6 western blot实验结果分析48-49
• 3.7 直线回归与线性相关结果分析49-51
• 第四章：讨论51-67
• 4.1 癫痫和癫痫动物模型51-55
• 4.1.1 癫痫的病因和发病机制51-52
• 4.1.2 癫痫动物模型52-55
• 4.2 Bcl-2 蛋白家族和癫痫55-61
• 4.2.1 Bcl-2 蛋白家族的结构和作用55-57
• 4.2.2 细胞凋亡和BH3蛋白57-59
• 4.2.3 Puma蛋白和癫痫59-61
• 4.3 CytC和癫痫61-64
• 4.3.1 CytC和细胞凋亡61-62
• 4.3.2 CytC和癫痫62-64
• 4.4 Puma和CytC的相互作用和关系64-67
• 4.4.1 Puma和CytC的相互作用64-65
• 4.4.2 Puma和CytC的关系65-67
• 第五章：结论和展望67-68
• 5.1 结论67
• 5.2 展望67-68
• 参考文献68-73
• 致谢73-75
• 攻读硕士期间公开发表的论文和著作75

【参考文献】

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本文编号：1021642