Notch1信号对脂多糖刺激后未成熟星形细胞胶质化的调控机制研究

发布时间：2017-10-14 08:17

  本文关键词：Notch1信号对脂多糖刺激后未成熟星形细胞胶质化的调控机制研究

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【摘要】：脑白质损伤(white matter damage, WMD)是早产儿脑损伤最常见的类型。宫内感染、炎症,可引起神经胶质细胞的损伤,是导致早产儿脑白质损伤的重要原因,宫内感染后脑内炎症反应影响未成熟星形细胞的增殖和胶质化是脑白质损伤关键因素之一,Notch1/Hes (Hairy enhallcer of spli信号可能参与宫内感染/炎症后未成熟星形细胞的增殖和胶质化机制。目的：研究脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)刺激后Notch1信号对未成熟星形细胞胶质化的调控作用及对胶质纤维酸性蛋白(Glail fibrillary acidic protein, GFAP)基因启动子区STAT3结合位点CpG岛甲基化水平的影响,从细胞分化角度进一步阐明官内感染/炎症导致早产儿脑白质损伤的机制。方法：1.取胎鼠脑组织行细胞培养,免疫荧光法检测(GFAP+/BrdU+(5-溴脱氧尿嘧啶核苷,5-Bromo-2-deoxyUridine)及荧光定量RT-PCR法(realtime fluorescence quantitative PCR,QPCR)检测星形细胞增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen, PNCA)、增殖细胞核抗原Ki67 (nuclcar-associated antigen Ki67, Ki67)的表达变化,同时荧光定量RT-PCR法检测LPS刺激后Notch1、Notch1细胞内区域(Notch intracellulardomains, NICD)及Hes1、Hes5在星形胶质细胞的表达变化特点。2.以Notch1 ICD-pEGFP载体转染星形胶质细胞增强Notch1信号通路下游信号的表达,以及构建Notch1 siRNA转染星形胶质细胞,采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Notch1基因的表达,此外予MW167干预后荧光定量RT-PCR法检测Notch1、ICD及Hes1、Hes5在星形胶质细胞的表达变化。免疫荧光法检测GFAP+/BrdU+以及QPCR检测星形细胞PNCA、Ki67的表达变化。3.予LPS刺激未成熟星形细胞,构建不同质粒载体转染,对星形细胞Notchl信号予过表达,研究星形细胞GFAP基因启动子区STAT3结合位点CpG岛甲基化水平变化。结果：1.LPS(5ug/ml)刺激星形细胞后, GFAP+/BrdU+细胞数较对照组增加(P0.05)；QPCR检测PCNA、Ki67 mRNA的相对表达量均增加(P0.05)。随时间增加,Notch1-ICD、Hesl、Hes5 mRNA的表达量均上调(P0.05)。Notchl、ICD、Hesl、 Hes5蛋白的表达量均上调(P0.05)。2. LPS (5ug/ml)刺激时,若上调Notchl,可以提高GFAP+/BrdU+的比例(P0.05); Notchl-ICD、PCNA、Ki67、Hes1、Hes5 mRNA全部都上调(P0.05); Notch1、 ICD、PCNA、Ki67、Hes1、Hes5蛋白的表达全部上调(P0.05); cck8增加(P0.05)。3. LPS (5ug/ml)刺激时,若下调Notchl,可以降低GFAP+/BrdU+的比例(P0.05); Notchl-ICD、PCNA、Ki67、Hes1、Hes5 mRNA全部都下调(P0.05); Notchl. ICD、PCNA、Ki67、Hes1、Hes5蛋白的表达全部下调(P0.05)；cck8减少(P0.05)。4. Notch1 ICD过表达组较阴性对照组细胞来看,甲基化程度明显降低(P0.05)。结论：1.LPS刺激促进星形胶质细胞的增殖和胶质化。2.LPS刺激促进Notch1及其下游信号Hes1、Hes5的表达。3.LPS刺激后,Notch1信号通路能正调控星形细胞的增殖及胶质化,有可能通过其下游信号通路Hes1、Hes5发挥作用。4.LPS刺激后Notch1信号对未成熟星形细胞增殖和胶质化行为的调控,可能通过调控GFAP基因启动子区STAT3结合位点CpG岛去甲基化过程。
【关键词】：脂多糖 炎症 星形细胞 Notch1
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 缩略词表12-15
• 引言15-17
• 第一部分 脂多糖刺激对未成熟星形胶质细胞增殖和胶质化影响的研究17-31
• 1 前言17-19
• 2 实验材料和方法19-23
• 3 结果23-28
• 4 讨论28-30
• 5 结论30-31
• 第二部分 脂多糖刺激后Notchl信号对未成熟星形细胞胶质化的调控机制研究31-63
• 1 前言31-34
• 2 实验材料和方法34-42
• 3 结果42-59
• 4 讨论59-62
• 5 结论62-63
• 全文结论63-64
• 参考文献64-69
• 综述69-79
• 参考文献75-79
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果79

【参考文献】

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1 张砚敏;苗文红;王华;许鹏;;复方霜蛎消结制剂对小鼠乳腺癌的抑瘤作用及相关实验研究[J];现代检验医学杂志;2010年04期

2 Henrik Hagberg;Carina Mallard;俞惠民;王来栓;;围生期宫内感染与早产儿脑损伤的相关问题[J];中国循证儿科杂志;2009年04期

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本文编号：1029984