基于抗核酸抗体的检测建立初步诊断多发性硬化症的方法

发布时间：2017-10-17 00:18

  本文关键词：基于抗核酸抗体的检测建立初步诊断多发性硬化症的方法

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【摘要】：多发性硬化症(Multiple Sclerosis,MS)是一种较为常见的能导致中枢神经系统出现大范围病变的自身免疫性疾病。该病的具体发病机制尚未明确,目前还未找到治疗该病的特效药,但是已有研究表明,MS病人的血清和脑脊液中出现抗核酸抗体,并且有抗核酸抗体在病灶处聚集的现象。为此,本实验利用这一特殊现象,分别以质粒和天然提取的RNA为抗原,建立了抗双链DNA抗体和抗RNA抗体的间接酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测MS的方法。首先,我们使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白片段(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein Peptide,MOG35-55)免疫C57BL/6雌性小鼠建立了多发性硬化症的动物模型,即实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimentally Allergic Encephalomyelitis,EAE)模型。在小鼠出现后肢瘫痪等EAE特征性症状后,我们处死小鼠并完整取出小鼠的脑组织和脊髓,通过使用脱髓鞘染色和免疫荧光技术确定动物模型建立成功。其次,我们分别建立了抗双链DNA抗体和抗RNA抗体的间接ELISA检测MS的方法。抗双链DNA抗体间接ELISA检测MS方法的最低检出限为0.16 ng/m L,线性检测范围为:0.5 ng/m L-100 ng/m L;抗RNA抗体间接ELISA检测方法优化后的条件为:天然RNA包被浓度为20μg/m L,血清稀释倍数为100倍。利用上述已经建立的间接ELISA方法分析了EAE模型小鼠(n=15)和空白组小鼠(n=15)血清和脑脊液中抗双链DNA抗体和抗RNA抗体,结果表明,致病组小鼠的脑脊液和血清中抗双链DNA抗体和抗RNA抗体水平均显著高于空白组(p0.01);利用上述已经建立的间接ELISA方法分析了从吉林大学第一医院获得的9名临床多发性硬化症病人和其他五种神经系统疾病各9名病人以及9名健康志愿者的血清样品,结果表明,MS患者血清中的抗双链DNA抗体的含量都在300 ng/m L以上,较其他五种神经系统疾病病人及正常人血清中的抗双链DNA抗体(均在50 ng/m L以下)差异显著(p0.01);MS临床病人血清中抗RNA抗体的检测值都为阴性对照的2.1倍以上,显著高于其他五种神经系统疾病病人和正常人血清中抗RNA抗体的检测值(p0.01)。上述结果表明,本研究建立的抗双链DNA抗体和抗RNA抗体的间接ELISA检测MS方法有较高的特异性和敏感性。本研究为简便、快速、准确的MS临床诊断提供了方法和实验基础。
【关键词】：多发性硬化症 抗双链DNA抗体 抗RNA抗体 实验性自身免疫性脑脊髓炎模型 ELISA
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R744.51
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 前言11-12
• 第一篇 文献综述12-24
• 第一章 多发性硬化症12-20
• 1.1 多发性硬化症简介12
• 1.2 发病机制及病理学12-13
• 1.3 临床分型13-14
• 1.4 诊断方法14-16
• 1.5 动物模型的简介16-17
• 1.6 抗DNA抗体的研究现状17
• 1.7 抗双链DNA抗体的检测方法17-19
• 1.8 抗RNA抗体的研究进展19-20
• 第二章 酶联免疫吸附试验20-24
• 2.1 酶联免疫吸附试验(ELISA)的发展历史20
• 2.2 ELISA的原理20-21
• 2.3 ELISA的分类21-24
• 第二篇 研究内容24-64
• 第一章 实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物模型的建立与验证24-30
• 1.1 材料和方法24-26
• 1.2 结果26-28
• 1.3 讨论28-29
• 1.4 小结29-30
• 第二章 抗DNA抗体间接ELISA检测方法的建立及临床验证30-48
• 2.1 材料和方法30-35
• 2.2 结果35-46
• 2.2.1 质粒的提取35-36
• 2.2.2 抗原包被浓度和抗体稀释倍数的选择36-37
• 2.2.3 抗原包被条件的选择37
• 2.2.4 封闭液和封闭时间的选择37-39
• 2.2.5 抗双链 DNA 抗体作用时间的选择39-40
• 2.2.6 HRP-山羊抗小鼠 Ig G 抗体作用时间的选择40-41
• 2.2.7 底物作用时间的选择41-42
• 2.2.8 完成优化的间接 ELISA 检测程序42
• 2.2.9 间接 ELISA 标准曲线42-43
• 2.2.10 添加回收实验43
• 2.2.11 实际样品的检测43-45
• 2.2.12 特异性检测45-46
• 2.3 讨论46
• 2.4 小结46-48
• 第三章 抗RNA抗体间接ELISA检测方法的建立及临床验证48-64
• 3.1 材料和方法48-53
• 3.2 结果53-62
• 3.3 讨论62
• 3.4 小结62-64
• 结论64-65
• 参考文献65-72
• 导师简介72-73
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果73-74
• 致谢74

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈永妍;李林;张旗;尹琳琳;;多发性硬化实验动物模型研究进展[J];基础医学与临床;2013年11期

2 潘祥奋;;多发性硬化症研究进展[J];现代诊断与治疗;2013年05期

3 王丹丹;朴月善;卢德宏;;多发性硬化症的神经病理学进展[J];北京医学;2013年05期

4 黄恒;凌洪权;陈燕凌;王颖旺;;鸡传染性贫血病检测方法研究进展[J];湖北畜牧兽医;2013年01期

5 杨代凤;刘腾飞;邓金花;顾俊荣;董明辉;;标记免疫分析在农兽药残留检测中的应用研究进展[J];中国农学通报;2012年30期

6 刘梅;蔡振林;蒋雨平;;多发性硬化诊断标准的进展与解读[J];中国临床神经科学;2012年04期

7 谢丽华;张浩;彭萍;;间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法检测抗双链DNA抗体的比较[J];实用预防医学;2011年11期

8 沈雪莉;卢希;张斯萌;崔梦遥;;多发性硬化脊髓受累临床与MRI对照研究[J];中国现代神经疾病杂志;2011年01期

9 顾健;张燕;陆义超;;一步法胶体金快速诊断法与ELISA检测猪瘟抗体的比较[J];上海畜牧兽医通讯;2010年01期

10 刘鸿林;杜志勋;;抗核抗体和抗双链DNA检测在系统性红斑狼疮诊断中的意义[J];中国医药导报;2008年01期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 尹琳琳;陈永妍;张旗;李林;;多发性硬化实验动物模型研究进展[A];2013年全国老年性痴呆与相关疾病学术会议论文汇编[C];2013年

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本文编号：1045726