高血糖加重脑缺血卒中后癫痫发作分子机制的初步研究
发布时间：2017-10-20 02:02
本文关键词：高血糖加重脑缺血卒中后癫痫发作分子机制的初步研究
【摘要】：目的明确高血糖对大鼠脑缺血卒中后癫痫发作情况,以及对脑缺血卒中后癫痫大鼠脑组织损伤的影响;探讨m TOR信号通路与高血糖增加脑缺血卒中后癫痫的关系。材料和方法健康SD雄性大鼠,体重220-250g,由宁夏医科大学动物中心提供。安静环境下饲养,给予充足洁净的水和摄食。将大鼠随机分成5组:假手术组、空白对照组、高血糖组、脑缺血组、高血糖㧏脑缺血组,每组10只:①假手术组:只分离双侧颈总动脉和迷走神经而不做结扎;②空白对照组:不予处理;③高血糖组:通过腹腔注射STZ建立高血糖模型;④脑缺血组:利用结扎双侧颈总动脉加低血压(2VO)的方法建立脑缺血模型;⑤高血糖㧏脑缺血组:通过腹腔注射STZ建立高血糖模型,常规饲养4周后,利用结扎双侧颈总动脉加2VO的方法建立脑缺血模型。脑缺血后观察各组大鼠行为变化和监测脑电变化;予脑缺血后24h后分别断头取脑,剥离海马组织,予㧟80℃冻存和灌注取脑进行石蜡包埋。通过TUNEL观察大脑神经元损伤状况;通过Wstern-Blot、PCR和免疫组化检测海马m TOR、p-m TOR表达情况。实验结果的数据采用均数±标准差(sx±)表示,数据分析采用单因素方差分析。先行方差齐性检验,组间差异统计学意义比较采用LSD-t检验,以p≤0.05为差异有统计学意义。结果①模型建立:高血糖组在腹腔注射STZ后,10只大鼠中有9只达到了实验要求(血糖浓度12mmol/l),高血糖㧏脑缺血组大鼠血糖浓度全部达到实验要求。常规饲养4周后,对高血糖㧏脑缺血组大鼠建立脑缺血模型,其中8只出现癫痫发作,1只死亡。然后脑缺血组大鼠建立脑缺血模型,其中1只出现癫痫发作,1只大鼠死亡。②行为学表现:高血糖大鼠在脑缺血10h左右出现癫痫大发作。发作最初,大鼠表现为胡须抖动、面部抽搐、眼睛紧闭、流涎和牙齿节律性咀嚼,随后会出现全身抖动、抽搐、站立并向后倾倒,发作剧烈者,会表现为在笼中四处逃窜,甚至出现跳跃。③电生理监测:脑缺血组大鼠出现了异常脑电,而高血糖㧏脑缺血组大鼠出现了典型的癫痫波型,脑电中表现有阵发性的高幅波形,并且具有癫痫波所特有的棘-慢波和多相棘波等波形,同时频繁出现多发棘波。④TUNEL:假手术组、空白对照组、高血糖组、脑缺血组和高血糖㧏脑缺血组的阳性细胞数分别为9.0±0.82、6.0±0.81、19.7±1.24、24.7±1.69、41.3±1.70。高血糖㧏脑缺血组与、高血糖组和脑缺血组之间具有统计学意义(p0.01),脑缺血与假手术组、空白对照组、高血糖组之间具有统计学意义(p0.05),高血糖组与假手术组、空白对照组之间具有统计学意义(p0.01),而假手术组与空白对照组之间无统计学意义(p㧐0.05)。结果表明高血糖不仅能够造成正常大鼠神经元的损伤,而且还能加重脑缺血大鼠海马神经元的损伤。⑤免疫组织化学:神经元胞浆呈棕黄色为阳性。p-m TOR在假手术组、空白对照组、高血糖组、脑缺血组和高血糖㧏脑缺血组中的阳性细胞数为:19.33±1.25、.15.67±1.24、51.33±2.87、44.33±1.69、31.33±1.26。高血糖组、脑缺血组和高血糖㧏脑缺血组与假手术组和空白对照组之间p-m TOR表达的差异有统计学意义(p㩳0.01),但高血糖㧏脑缺血组与高血糖组和脑缺血组比较,p-m TOR的表达有所降低(p㩳0.05);假手术组与空白对照组之间p-m TOR的表达无统计学意义(p㧐0.05)。提示m TOR信号通路激活并不是高血糖加重脑缺血卒中后癫痫的原因。⑥Western-Blot:使用分析软件Gel-Pro analyzer对结果进行分析,计算出各组的相对灰度值;p-m TOR/m TOR在假手术组、空白对照组、高血糖组、脑缺血组和高血糖㧏脑缺血组的比值0.55±0.06、0.41±0.05、1.43±0.09、1.16±0.08、0.93±0.08(p㩳0.01)。结论高血糖能加重脑缺血后脑组织的损伤,并极大的提高了癫痫发生率;p-m TOR在高血糖组、脑缺血组和高血糖㧏脑缺血组中明显升高,但高血糖㧏脑缺血组低于高血糖组和脑缺血组,初步推断m TOR信号通路不是高血糖加重脑缺血卒中后癫痫发作的原因。
【关键词】：高血糖 脑缺血 卒中后癫痫 mTOR
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3;R742.1
【目录】：
- 摘要4-6
- ABSTRACT6-9
- 中英文缩略词表9-11
- 前言11-14
- 材料和方法14-31
- 结果31-35
- 讨论35-39
- 参考文献39-44
- 结论44-45
- 综述45-53
- 综述参考文献49-53
- 致谢53-54
- 攻读学位期间发表的学术论文54-55
- 个人简历55
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 刘玉和;于春艳;王皓;孙连坤;;Vk3对宫颈癌Hela细胞mTOR信号转导蛋白基因表达的影响[J];吉林大学学报(医学版);2009年02期
2 岳文涛;王小敏;王s，
本文编号：1064580
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