新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体中microRNA表达谱变化及miR-375对松果体功能的影响

发布时间：2017-10-26 14:14

  本文关键词：新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体中microRNA表达谱变化及miR-375对松果体功能的影响

  更多相关文章： 缺氧缺血 松果体 新生大鼠 细胞培养 miR-375 慢病毒 AANAT MT

【摘要】：目的:通过制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,检测脑损伤后大鼠松果体中micro RNA的表达谱变化;并进行松果体细胞培养,建立细胞缺氧缺糖模型,用miR-375慢病毒载体转染细胞,检测转染效率及松果体功能的变化,探讨miR-375在缺氧缺糖中对松果体功能的影响。方法:采用7日龄SD新生大鼠,根据改良Rice-Vannucci法建立HIBD模型。将新生大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺氧缺血组(HIBD组),采用基因芯片及RT-qPCR法检测HIBD后24 h大鼠松果体中micro RNA表达谱的变化;采用新生24h以内的SD大鼠进行松果体培养,行氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)的处理方法,模拟缺氧缺血模型。选取氧糖剥夺后0 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h六个时间点,RT-qPCR测定氧糖剥夺前后AANAT mRNA及miR-375表达的变化;ELISA法检测褪黑素(MT)水平的变化;用CCK8法检测细胞活性。采用miR-375慢病毒载体转染后,行上述实验,初步探讨松果体中micro RNA在缺氧缺血性脑损伤中的可能机制。结果:1、芯片及RT-qPCR结果显示,新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体中micro RNA表达谱发生变化。2、RT-qPCR结果显示,缺氧缺糖后miR-375表达上调,24 h达到高峰后下降,72 h趋向0 h水平;AANAT表达下调,12 h左右达最低点,72 h趋向0 h水平;miR-375慢病毒转染细胞后miR-375表达明显上调,72 h趋于稳定;AANAT表达下调,48 h趋于稳定;miR-375慢病毒转染细胞后行缺氧缺糖实验,miR-375表达上调,24 h达到高峰;AANAT表达下调,24 h左右达最低点。3、ELISA结果发现,缺氧缺糖后MT分泌水平下降,24 h左右达最低点,96 h左右恢复缺氧缺糖0 h水平;miR-375慢病毒转染细胞后MT分泌水平下降,72 h趋于稳定;miR-375慢病毒转染细胞后行缺氧缺糖实验,MT分泌水平下降,24 h及48h之间达最低点。4、CCK8结果显示,缺氧缺糖0.5 h、1 h后,细胞增长活力无明显变化,缺氧缺糖2 h后,可使松果体细胞获得适度损伤,缺氧缺糖3 h后,细胞活力明显下降。结论:1.新生大鼠HIBD后松果体micro RNA表达谱发生改变,其中miR-375明显上调。2.松果体细胞缺氧缺糖后miR-375、AANAT表达,分泌MT水平均发生变化。3.松果体细胞缺氧缺糖损伤后,miR-375加重缺氧缺糖造成松果体功能的损害。4.松果体细胞会随缺氧缺糖时间延长细胞活性下降。
【关键词】：缺氧缺血 松果体 新生大鼠 细胞培养 miR-375 慢病毒 AANAT MT
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742
【目录】：

• 摘要4-6
• abstract6-9
• 引言9-12
• 一、新生儿缺氧缺血性脑病的研究现状9
• 二、缺氧缺血性脑损伤后松果体的参与及重要性9-10
• 三、MicroRNA的产生及作用10
• 四、松果体中micro RNA10-12
• 第一部分 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体中micro RNA表达谱变化12-27
• 前言12
• 材料与方法12-18
• 结果18-24
• 讨论24-27
• 第二部分miR-375对松果体功能的影响27-44
• 前言27
• 材料与方法27-31
• 结果31-41
• 讨论41-44
• 结论44-45
• 实验不足及展望45-46
• 参考文献46-50
• 综述50-61
• 参考文献56-61
• 英汉双解缩略词61-62
• 研究生期间发表及待发表文章62-63
• 本课题资助项目63-64
• 致谢64-65

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 华涛,杨天明;松果体移植与衰老[J];中华老年医学杂志;2000年03期

2 叶百宽,郭霞珍;松果体研究进展[J];解剖科学进展;2000年01期

3 狄荣科,马瑞,周志强,刘益仁,严丽荣,崔龙,冯振卿;人胎松果体发育的形态测量分析[J];镇江医学院学报;2000年01期

4 吴亮生,陈文玉,欧可群,王蕾,马玉琼,杨正伟;松果体内的神经纤维终末同松果体细胞的联系—电镜定量研究[J];解剖学杂志;2001年03期

5 樊宇兵,侯广棋,王保芝;哺乳动物松果体的构造和功能[J];神经解剖学杂志;2001年01期

6 卢守祥 ,刘洪涛;自主神经系统与松果体[J];西安交通大学学报(医学版);1980年02期

7 梁德年;;松果体与生物钟[J];黑龙江医药;1981年10期

8 洪沂生;;松果体代谢及其调控[J];四川生理科学动态;1982年01期

9 高雨仁;杨菊香;;哺乳动物松果体的超微结构(讲座)[J];山西医学院学报;1983年02期

10 陈丽琏;;体外培养大白鼠松果体细胞的超微结构[J];解剖学杂志;1985年04期

中国重要会议论文全文数据库 前5条

1 樊宇兵;王保芝;侯广棋;赵玉珍;;大鼠松果体组织结构的增龄变化[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

2 廖华;;大鼠松果体细胞的微囊包裹研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

3 缪珀;冯星;;E64d对活体缺氧缺血性脑损伤新生大鼠松果体的短期影响[A];中华医学会第十七次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2012年

4 凌瑞琴;;生物钟障碍关系睡眠与衰老的研究[A];2006年中国睡眠研究会第四届学术年会知识更新讲座[C];2006年

5 樊宇兵;王保芝;侯广琪;王丽;李向印;王建钦;;松果体脑砂与胶原纤维关系的SEM观察和能谱化学元素分析[A];第二届全国扫描电子显微学会议论文集[C];2001年

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 廖华;组织工程化人工松果体-大鼠松果体细胞微囊的实验研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年

2 樊宇兵;松果体激素的化学性质及其释放入脑脊液途径的形态学研究[D];河北医科大学;2007年

3 梁欣;艾灸对D-半乳糖致衰老大鼠松果体氧化损伤影响的实验研究[D];成都中医药大学;2008年

4 王国卿;大鼠松果体生物钟基因的昼夜表达以及外周血淋巴细胞钟控基因的筛选与鉴定[D];苏州大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 金雪梅;松果体参与鹅就巢调控过程的分子网络构建[D];四川农业大学;2015年

2 刘明华;新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体中microRNA表达谱变化及miR-375对松果体功能的影响[D];苏州大学;2016年

3 王正波;牦牛松果体的组织结构及超微结构[D];甘肃农业大学;2004年

4 贾健;老年大鼠松果体结构特点及其生长抑素表达的形态学观察[D];河北医科大学;2011年

5 姜善雨;新生大鼠缺氧缺血性脑损伤对松果体合成褪黑素功能的影响[D];苏州大学;2004年

6 丁欣;缺氧缺血性脑损伤新生大鼠松果体钟基因表达和血浆褪黑素浓度的变化[D];苏州大学;2007年

7 王建林;山羊松果体细胞微囊化相关炎性因子初步研究[D];华中农业大学;2012年

8 缪珀;E64d对活体缺氧缺血性脑损伤新生大鼠松果体的短期影响[D];苏州大学;2012年

9 魏建恩;松果体及其褪黑素对大鼠下丘脑CRH神经元的影响[D];福建医科大学;2005年

10 鲍莉;缺氧缺血性脑损伤新生大鼠松果体Per1和Bmal1基因表达和血浆褪黑素浓度的变化[D];苏州大学;2008年

，

本文编号：1099009