卵巢切除对SOD1G93A转基因鼠腰段脊髓caspase-12基因表达的影响

发布时间：2017-10-30 03:06

  本文关键词：卵巢切除对SOD1G93A转基因鼠腰段脊髓caspase-12基因表达的影响

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【摘要】：目的:肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一慢性进行性神经系统变性疾病,主要累及上、下运动神经元,表现为肌无力、肌萎缩和锥体束征。有研究证实在ALS病人和SOD1转基因鼠的脊髓前角运动神经元内内质网应激相关蛋白水平呈现上调趋势。另有报道在SOD1转基因小鼠症状前期,与内质网应激相关的促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白平衡失常。以上都说明内质网应激与ALS发病及病程进展有关。Caspase-12为位于内质网外膜的半胱氨酸蛋白酶家族成员之一。有报道称caspase-12基因敲除小鼠可对抗内质网应激诱发的凋亡,而对其他形式凋亡信号刺激仍有反应。Caspase-12在内质网应激凋亡过程中处于关键位置,在死亡受体和线粒体凋亡途径中不被激活。说明caspase-12参与内质网应激介导的凋亡,与其他类型凋亡进程无关。本实验室前期研究证实SOD1G93A转基因鼠卵巢切组比SOD1G93A转基因鼠非卵巢切组提前发病,说明雌激素在ALS中发挥神经保护作用(《卵巢切除对家族性肌萎缩侧索硬化动物模型的影响》,学位论文,2012,郑倩)。许多研究显示雌激素可作用于其相应受体干预内质网应激。本实验通过观察卵巢切除对SOD1G93A转基因鼠腰段脊髓caspase-12基因表达的影响,探讨caspase-12、雌激素在SOD1G93A转基因鼠发病进程中可能存在的关系。方法:1动物模型及分组繁殖并饲养家族性肌萎缩侧索硬化动物模型即经聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定为SOD1G93A转基因的雌性小鼠,随机将10只5周龄携带SOD1G93A基因的小鼠分为2个实验组(n=5只):卵巢切除组(OVX组)、阳性对照组(NO-OVX组)。对照组为同窝、同月龄非SOD1G93A转基因雌性小鼠(CON组)。2取材用10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉后,摘除眼球取血后,迅速断头并剥离取出脑和脊髓组织,置于Eppendorf管内,投于盛有液氮的保温桶内,转移至超低温冰箱储存待用(OVX组、NO-OVX组分别于各组发病期取材,CON组与NO-OVX组同时取材)。3基因表达谱研究利用基因芯片技术对3组小鼠腰段脊髓进行基因表达谱分析。4逆转录定量PCR(q RT-PCR)使用q RT-PCR技术检测不同分组SODIG93A小鼠及阴性对照鼠腰段脊髓内caspase-12基因表达情况。5统计学处理采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行统计处理。数据的比较采用单因素方差分析,组间行两两比较采用LSD检验,以a=0.05为显著性检验标准。结果:1基因芯片结果1.1聚类分析结果将OVX组、NO-OVX组、CON组3组样本得到的差异基因进行聚类分析,聚类分析后得到聚类热图,每组样本均聚集在一起。OVX组与NO-OVX组、CON组比较差异基因表达明显。1.2基因筛选结果选取SOD1G93A转基因雌性小鼠OVX组、NO-OVX组、CON组基因表达谱进行对比,取P≤0.05,fold-change值≥+2或≤-2为筛选条件。其中OVX组与NO-OVX组相比共筛选出差异表达基因21个,表达上调的基因有19个,表达下调的基因有2个。OVX组与NO-OVX组差异基因列于Table 1。其中caspase-12基因OVX组与NO-OVX组相比fold-change值为2.2458。2 Caspase-12在OVX组、NO-OVX组、CON组的表达。q RT-PCR结果显示,OVX组腰段脊髓caspase-12基因表达量与NO-OVX组相比升高,差异有统计学意义。NO-OVX组腰段脊髓caspase-12基因表达量与CON组相比差异无统计学意义。结论:1 Caspase-12基因在卵巢切除SOD1G93A转基因鼠腰段脊髓表达增加。2雌激素可能通过抑制内质网应激介导的凋亡对SOD1G93A转基因鼠发挥神经保护作用。
【关键词】：Caspase-12 内质网应激 凋亡 肌萎缩侧索硬化 脊髓 卵巢切除 基因芯片 逆转录定量PCR
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R744.8
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-19
• 结果19-20
• 附图20-22
• 附表22-23
• 讨论23-27
• 结论27-28
• 参考文献28-32
• 综述 Caspase家族与中枢神经系统疾病32-47
• 参考文献38-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

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本文编号：1115827