Eg5蛋白及其靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine在神经母细胞瘤中表达及功能研究

发布时间：2017-11-02 03:11

  本文关键词：Eg5蛋白及其靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine在神经母细胞瘤中表达及功能研究

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【摘要】：目的:我们旨在研究驱动蛋白Eg5在神经母细胞瘤中表达及其靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine(STLC)对神经母细胞瘤不同细胞的诱导功能作用。方法:通过免疫荧光及western blot、流式细胞术检测Eg5蛋白在神经母细胞瘤(组织及细胞)中的表达水平;通过相差显微镜观察STLC对细胞形态学影响;采用CCK-8法检测STLC对细胞增殖影响;流式细胞术检测STLC对细胞周期的影响;以流式细胞术及western blot检测经STLC诱导后细胞蛋白表达变化;并经DAPI实验观察STLC对细胞核形态变化的影响;最后,通过采用FISH法检测STLC对原癌基因MYCN扩增的影响,免疫荧光法观察纺锤丝变化等实验,初步研究诱导机制。结果:1.通过免疫荧光及western blot、流式细胞术等实验显示Eg5蛋白在神经母细胞瘤组织及细胞株中稳定表达。2.以Eg5蛋白靶向抑制剂对不同神经母细胞瘤细胞诱导后,细胞胞体形态增大,突出于水平面,细胞核增大,细胞增殖抑制明显;CCK-8细胞凋亡检测见细胞增殖抑制明显;流式细胞仪检测示在STLC诱导后,细胞凋亡增多。细胞周期抑制于G2/M,细胞核分裂停止;western blot、流式细胞术检测可见在STLC诱导之后,Eg5蛋白表达减少;DAPI实验显示细胞核增大明显,后期出现核碎裂等细胞凋亡现象;FISH检测见MYCN基因扩增未见明显变化。结论:神经母细胞瘤组织及细胞中均稳定表达Eg5蛋白,其靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine(STLC)通过抑制Eg5功能,影响神经母细胞瘤细胞的分裂及增殖,从而促进细胞凋亡。结果提示Eg5有望作为神经母细胞瘤分子治疗的靶点。
【关键词】：神经母细胞瘤 Eg5蛋白 S-Trityl-L-Cysteine(STLC)
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 绪论10-12
• 一 驱动蛋白EG5在神经母细胞瘤中的表达12-22
• 1.材料和试剂12-15
• 1.1 主要仪器及常用耗材12
• 1.2 实验主要相关试剂12-13
• 1.3 主要试剂配制方法13-14
• 1.4 所选细胞及病例资料14-15
• 2.实验方法15-17
• 2.1 FISH法检测细胞株MYCN基因扩增方法15
• 2.2 组织免疫荧光实验方法及细胞免疫荧光实验方法15-16
• 2.3 流式细胞仪检测细胞蛋白表达方法16-17
• 2.4 蛋白免疫印记（Western-blotting）17
• 3.实验结果17-21
• 3.1 细胞MYCN扩增情况17-18
• 3.2 免疫荧光(组织)18-20
• 3.3 免疫荧光(细胞)20
• 3.4 流式细胞仪检测细胞蛋白表达20-21
• 3.5 蛋白免疫印记（细胞水平）21
• 4.小结21-22
• 二 驱动蛋白EG5靶向抑制剂S-TRITYL-L-CYSTEINE（STLC）对神经母细胞瘤不同细胞株诱导研究22-32
• 1.材料和试剂22
• 2.实验方法介绍22-26
• 2.1 细胞培养技术及细胞形态观察22-24
• 2.2 CCK-8法检测细胞增值变化24
• 2.3 细胞免疫荧光观察Eg5蛋白表达变化24-25
• 2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡25
• 2.5 流式细胞仪检测细胞周期25
• 2.6 流式细胞仪检测细胞蛋白表达变化25-26
• 2.7 Western-blot检测细胞蛋白表达变化26
• 2.8 DAPI细胞核染色实验26
• 3.实验结果26-32
• 3.1 相差显微镜对细胞形态观察26-28
• 3.2 CCK-8 法检测细胞增殖变化28
• 3.3 免疫荧光观察Eg5蛋白表达变化28-29
• 3.4 流式细胞仪检测细胞凋亡29
• 3.5 流式细胞仪检测细胞周期29-30
• 3.6 流式细胞仪检测细胞蛋白表达变化30
• 3.7 Western-blot检测细胞蛋白表达变化30-31
• 3.8 DAPI细胞核染色实验31-32
• 4.小结32
• 三 神经母细胞瘤细胞经驱动蛋白EG5靶向抑制剂S-TRITYL-L-CYSTEINE（STLC）诱导机制初步研究32-37
• 1.引言32-33
• 2.实验方法介绍33-34
• 2.1 FISH荧光探针法检测STLC诱导后MYCN基因扩增变化33
• 2.2 细胞免疫荧光观察 α-tubulin蛋白变化33-34
• 3.实验结果34-36
• 3.1 FISH荧光探针法检测MYCN基因扩增变化情况34-35
• 3.2 细胞免疫荧光检测细胞 α-tubulin变化35-36
• 4.小结36-37
• 四 讨论37-39
• 五 参考文献39-42
• 六 综述 驱动蛋白Eg5的生物学功能,调节机制及靶向抑制剂研究进展42-56
• 参考文献50-56
• 致谢56-57
• 参加学术会议57
• 参与科学课题研究57
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录57
• 个人荣誉57

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本文编号：1129714