山东部分地区乙型脑炎患者中西尼罗病毒感染情况的研究

发布时间：2017-11-13 23:17

  本文关键词：山东部分地区乙型脑炎患者中西尼罗病毒感染情况的研究

  更多相关文章： 流行性乙型脑炎病毒 西尼罗病毒 酶联免疫吸附试验 间接免疫荧光测定 抗体效价

【摘要】：目的乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的主要流行区域是亚洲,我国自1949年于北京分离出第一株JEV而今已累计60余年历史,目前JEV已成为中国流行最为广泛的虫媒病毒之一。世界上第一株西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)于1937年在乌干达境内一名发热妇女的血液中被分离出,此后在全球范围内广泛传播,由WNV感染所引起的西尼罗热(West Nile fever, WNF)已经成为全球最严重的虫媒传染病之一。2014年,吕志等首次在中国新疆喀什地区的尖音库蚊中分离出5株WNV,并在该地区部分发热病人的血清样本中检测到WNV中和抗体,表明中国也存在着WNV的流行风险。JEV和WNV同属于黄病毒科(Flaviviridae)、黄病毒属(Flavivirus)、乙型脑炎血清群,二者均可通过库蚊等媒介传播,感染后均可引起严重神经系统疾病,二者引起的症状在临床诊断中不容易区分,目前乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE)的诊断通常基于JEV抗体检测,由于JEV和WNV抗体存在交叉反应,因此该种方法检测的结果很有可能出现WNV感染的误诊。山东省是JE的高发地区,本研究以2013年山东部分地区临床诊断为JE的病人为研究对象,通过病毒分离、RT-PCR和血清抗体检测的方法,研究该病人中是否存在WNV感染,以及JEV和WNV抗体的交叉反应情况,为JEV和WNV感染的诊断和预防控制提供科学依据。方法1.标本来源山东省济南市传染病医院2013年9～10月入院的242例病人,根据《流行性乙型脑炎诊断标准WS214-2008》临床诊断为JE,共采集急性期血清和脑脊液214份(以入院第一次采集样本为急性期样本,包括177份血清和37份脑脊液),恢复期血清58份,其中30例病人同时有急性期和恢复期血清。病人来自滨州、德州、菏泽、济南、聊城、泰安等地,以济南市为主。2.病毒的分离鉴定使用DMEM培养液(含10%胎牛血清,1%青链霉素混合液)常规培养BHK21细胞,待细胞长成至单层后,取急性期的血清和脑脊液接种,每隔24 h观察细胞病变(CPE),将发生CPE的标本取上清提取RNA,通过巢式RT-PCR扩增JEV和WNV的核酸,扩增阳性者经测序验证后确定是否为JEV或WNV感染；如1w后无CPE出现,使用BHK21细胞继续传3代,每代均提取培养物上清中的RNA进行WNV和JEV核酸的检测。细胞至传3代后,WNV或JEV核酸检测均为阴性的样本,病毒分离定为阴性。对于出现细胞CPE,且JEV或WNVRNA检测证实为阳性的病例,实验室确诊为JEV或WNV感染。3.病毒RNA的检测 对急性期的血清和脑脊液分别提取其中的RNA,使用巢式RT-PCR的方法扩增JEV和WNV的RNA。对于扩增阳性的标本,进行序列测定证实为JEV或WNV感染,并用MEGA5.0软件分析基因序列确定病毒的型别。4.患者血清和脑脊液中抗体的检测运用间接免疫荧光(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)法对单份急性期样本(血清和脑脊液)进行JEV-IgM和WNV-IgM检测；对双份血清样本,急性期和恢复期血清分别进行JEV-IgM和WNV-IgM、JEV-IgG和WNV-IgG检测；对单份恢复期血清进行JEV-IgG和WNV-IgG检测。IFA中,急性期血清中JEV-IgM、WNV-IgM和恢复期血清中JEV-IgG、WNV-IgG均从1：32开始稀释,检测抗体效价；ELISA法从1：100(急性期)或1：41(恢复期)开始进行倍比稀释,检测抗体效价。IFA和ELISA中,均以抗体阳性的最高稀释度作为抗体效价。对于血清学检测结果为下列两种情况的视为WNV感染可疑病例：①两种病毒抗体检测均阳性样本：抗体效价WNV-IgM/JEV-IgM≥4或WNV-IgG/JEV-IgG≥4者。②WNV-IgM (+)、JEV-IgM(-)或WNV-IgG (+)、JEV-IgG (-)的样本。结果1.病毒的分离鉴定 214份急性期血清和脑脊液中均未分离到JEV或WNV。2.病毒RNA的检测巢式RT-PCR扩增结果显示,急性期血清中有4例病人JEV RNA的E片段扩增结果为阳性,经测序证实为JEV RNA, JEV RNA阳性率为1.87%(4/214),未扩增出WNV RNA的3'非编码区的目的片段,MEGA5.0软件的基因序列分析结果表明4例患者感染的JEV均为基因Ⅲ型。3.抗体检测的结果IFA检测结果显示,无论是急性期还是恢复期血清,从1：32开始,随着稀释度的增加,荧光逐渐变弱,未检测到抗体效价WNV-IgM/ JEV-IgM≥4或WNV-IgG/JEV-IgG≥4的标本。ELISA检测结果显示,急性期样本中,WNV-IgM (+)的共74份,有3个样本抗体效价WNV-IgM/JEV-IgM≥4,1个样本WNV-IgM效价为1：800,而JEV-IgM抗体为(-),为高度可疑病例。恢复期样本中,WNV-IgG和JEV-IgG共同(+)的共18例,其中2例抗体效价WNV-IgG/JEV-IgG≥4,另有9个样本JEV-IgG(-)、WNV-IgG(+)。根据WNV-IgM、 WNV-IgG的ELISA效价检测结果,JE患者中WNV感染疑似病例为15例。结论山东省部分地区2013年临床确诊为JE的患者中,JEV RNA检测阳性的患者有4名,其血清中扩增到JEV RNA E区的片段,序列分析证实均为JEV的基因Ⅲ型。根据血清抗体检测结果推测,患者中可能存在WNV感染病例,但由于本次研究因同时具有急性期和恢复期的双份血清样本较少,又无WNV蚀斑减少中和试验(PRNT)对WNV抗体进行进一步验证,故不能完全支持山东省存在WNV流行的情况。结合本次研究结果和山东地区存在WNV传播媒介的情况,提示山东省加强JE防控的同时应增加WNV的监测。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.3

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 强来英,沈彤庆,裴丽健,邵一鸣;常见理化因素对HIV抗体检测稳定性的试验研究[J];中国艾滋病性病;2001年04期

2 王露,安允萍,米娜瓦,于玲,古丽皮叶;喀什地区HIV抗体检测阳性结果分析[J];疾病监测;2002年06期

3 靳晓红,刘元东,苗仲水,黄尉初,郭慧兰,董业山;某部1996～2002年度新兵HIV抗体检测分析[J];解放军预防医学杂志;2003年06期

4 林嘉友,秦晓光;掌握抗体检测的临床意义与实验要求[J];中华检验医学杂志;2000年03期

5 伍建宁,夏传友;顺德市1999年无偿献血者的HIV抗体检测情况分析[J];广东卫生防疫;2000年03期

6 黄兴周;;芒市地区外国劳务HIV抗体检测与“三证”办理情况的调查分析[J];旅行医学科学;2000年02期

7 刘开明,王建军,余飞,王绍贵;艾滋病初筛实验室HIV抗体检测中应注意的问题[J];中国国境卫生检疫杂志;2001年04期

8 刘汉 ,景本年 ,李卓江;血小板相关抗体检测及其临床研究[J];中国综合临床;2002年06期

9 周培霞 ,鲁莹,吴艳妹,彭琼,洪慈;第三代血清HP抗体检测的应用价值[J];中国医师杂志;2002年06期

10 林祥伟;谢若男;李冬梅;曾嫦;刘兴进;;汕头市部分人群单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体检测[J];传染病信息;2002年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 全慧芬;;爱滋病流行状况及孕产妇免费病毒抗体检测宣教[A];中国水利电力医学科学技术学会临床医学专业委员会外科专业、护理专业2007年会论文汇编[C];2007年

2 虞伟;张瑾;顾晨曦;贾丽;李晓军;武建国;;三种不同固相化方法用于抗CCP抗体的测定研究与结果评价[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

3 张申英;张欣欣;刘晶;卢敏;汪垣;;重组丙型肝炎病毒包膜蛋白2抗体检测及其临床意义[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年

4 孙建新;吉旭阳;毕晓郁;;丙肝病毒单片段抗体检测分析[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年

5 刘帅;王贝贝;崔丽丽;靳兴军;张跃;汪明;;几种弓形虫IgG抗体检测方法的比较分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年

6 张方;王嘉祺;马慧;;老年住院患者呼吸道常见病毒IgM抗体检测[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年

7 许慧;崔京涛;郝英英;倪安平;;巨细胞病毒IgG抗体亲合力分析与IgM抗体检测的评价[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

8 吴敏慧;刘毅;刘洪莉;;血小板交叉配合及抗体检测方法的建立及其应用[A];中国输血协会第四届输血大会论文集[C];2006年

9 许慧;崔京涛;郝英英;倪安平;;巨细胞病毒IgG抗体亲合力分析与IgM抗体检测的评价[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

10 郑优荣;李少华;侯华嘉;黄小丹;陈冲;;广州地区1995～1999年献血人群HIV抗体检测情况分析[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 通讯员 刘弈　邓顺梅;建始县疫控中心抗体检测技术全面更新[N];恩施日报;2009年

2 陈建忠;HIV抗体检测女性注意事项[N];保健时报;2004年

3 记者 戎明昌邋林亚茗 通讯员 郭云云;将HIV抗体检测纳入医保[N];南方日报;2008年

4 ;动物诊断用狂犬病抗体检测试剂盒问世[N];今日信息报;2003年

5 浦 汶;变实验鼠为高效“抗体工厂”[N];大众科技报;2003年

6 ;最新调查显示四成儿童体内有SARS抗体[N];中国高新技术产业导报;2003年

7 本报记者 聂翠蓉;小小纳米抗体潜力大[N];科技日报;2005年

8 张东;“检得出，检得了，检得好”[N];中国国门时报;2005年

9 通讯员燕文华 张金生;沙湾采用抗体检测牲畜防疫[N];伊犁日报(汉);2009年

10 记者冯瑾;提倡新人接受病毒抗体检测[N];新疆日报(汉);2009年

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 陈长春;抗BONTS抗体的制备、筛选及抗体间协同保护机制的研究[D];上海交通大学;2012年

2 付庆锋;血清P53抗体与BRAF基因突变检测在PTC诊疗中的决策作用[D];吉林大学;2016年

3 潘鹏涛;基于p53抗体的肿瘤早期筛查及肿瘤检测研究[D];东北师范大学;2014年

4 高宝山;肾移植受者血清多反应性抗体与HLA抗体的相关性及对移植肾长期存活的影响[D];吉林大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 赵永祥;四川部分地区2013-2014年猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查[D];四川农业大学;2015年

2 王芳蕊;天津市高致病性猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查及活疫苗应用试验[D];吉林大学;2016年

3 乔一丹;WTH3多克隆抗体的制备及其鉴定[D];吉林大学;2016年

4 耿晓蕊;河北省某规模化猪场CSF、PRRS和PR抗体的检测与分析[D];西北农林科技大学;2016年

5 李春燕;猪重要病毒检测方法的建立及其在2015年陕西省猪群中的感染及抗体检测[D];西北农林科技大学;2016年

6 陈宜阳;猪戊型肝炎病毒抗体阻断ELISA检测方法的建立与应用[D];西北农林科技大学;2016年

7 黄刚;2015年宁县4种动物疫病免疫抗体检测与分析[D];西北农林科技大学;2016年

8 苏祥;山东部分地区乙型脑炎患者中西尼罗病毒感染情况的研究[D];山东大学;2016年

9 樊燕峰;酶联免疫吸附试验（ELISA）抗体检测与~(13)C呼气试验及尿素酶试验在HP检测中的比较研究[D];山西医科大学;2014年

10 缪美华;抗α-1,4-D-聚半乳糖醛酸抗体与非肾炎型儿童过敏性紫癜的关系研究[D];苏州大学;2016年

，

本文编号：1182835