大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症及多巴胺神经元损伤中的作用

发布时间：2017-11-14 05:07

  本文关键词：大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症及多巴胺神经元损伤中的作用

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【摘要】：目的:大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症及多巴胺神经元损伤中的作用。方法:以BV2细胞和原代小胶质细胞为研究对象,采用肿瘤坏死因子(TNF-α)和细菌脂多糖(LPS)建立细胞炎症模型。第一部分:采用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3(microtubule-associated protein light chain 3)、p62及Beclin1的表达水平;Q-PCR法检测小胶质细胞M1和M2表型marker的m RNA水平的变化;第二部分:采用定量和逆转录PCR(Quantitative and reverse transcription PCR)检测M1表型marker(i NOS、IL-1β)以及M2表型marker(Arginase、Ym1/2)m RNA水平的变化;用研究自噬的工具药(雷帕霉素,白藜芦醇,3甲基腺嘌呤)、血清剥夺和敲减自噬相关基因Atg5,Q-PCR法检测M1及M2表型marker m RNA水平的变化;第三部分:将原代小胶质细胞培养的上清以1:2的比例和神经元培养基混合后,和原代中脑神经元共同培养24h,通过CCK8检测不同组别原代中脑神经元细胞的活力,并通过免疫荧光以MAP-2标记神经元观察神经元突起的变化。结果:第一部分:TNF-α(1ng/ml和5ng/ml)作用于小胶质细胞可以使自噬相关蛋白LC3、Beclin1、p62升高(P0.05),激活自噬;TNF-α(5ng/ml)作用于小胶质细胞,可以使小胶质细胞M1 marker(i NOS、IL-1β)的m RNA水平升高(P0.05),而M2marker(Arginase、Ym1/2)的m RNA水平下降(P0.05)。第二部分:在TNF-α(5ng/ml)和LPS(100ng/ml)作用于小胶质细胞的细胞模型上,用研究自噬的工具药上调自噬,可以发现小胶质细胞M1 marker(i NOS、IL-1β)的m RNA水平下降(P0.05)而M2 marker(Arginase、Ym1/2)的m RNA水平升高(P0.05);而下调自噬,观察到相反的变化。第三部分:通过CCK8检测神经元活力发现,和单独TNF-α作用组的小胶质细胞上清共培养后神经元活力下降;神经元和抑制自噬组的小胶质细胞条件培养上清共培养后,中脑神经元活力下降更明显;同样和抑制自噬组的小胶质细胞上清共培养,中脑神经元的突起明显的缩短;与增强自噬的小胶质细胞上清共培养观察到相反的变化。结论:大自噬可以调控小胶质细胞介导的炎症并且增强自噬观察到小胶质细胞向M2表型趋化,并减弱小胶质细胞条件培养基对中脑损伤元的损伤作用。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.5

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本文编号：1183965