阪崎克罗诺杆菌侵袭血脑屏障主要细胞特性研究

发布时间：2017-11-22 14:19

  本文关键词：阪崎克罗诺杆菌侵袭血脑屏障主要细胞特性研究

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【摘要】：阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)是一种重要的食源性致病菌,能引起新生儿严重的菌血症、小肠结肠炎和脑膜炎。其中,由阪崎克罗诺杆菌引起的脑膜炎是一种中枢神经系统严重感染的疾病,严重者甚至死亡。目前,有研究证实阪崎克罗诺杆菌污染食品后,可侵入血液,经血液传播,通过血脑屏障侵入中枢神经系统而引起脑膜炎,然而阪崎克罗诺杆菌如何穿过血脑屏障进入中枢神经系统还没有定论。本研究以40株前期筛选得到的阪崎克罗诺杆菌为材料,采用多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)结合肠杆菌基因间重复序列PCR分型(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus PCR,ERIC-PCR)方法,通过生物信息学分析,筛选出与临床致病性有明显相关性的代表性菌株。使用血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)主要组成细胞人脑微血管内皮细胞(Human brain microvessel endothelial cell)和星形胶质瘤细胞(U251)作为供试细胞,通过体外侵袭、穿胞及细胞因子检测等试验,验证了阪崎克罗诺杆菌侵袭血脑屏障主要组成细胞的能力,为更好的揭示由阪崎克罗诺杆菌引发脑膜炎的部分致病机理提供依据。主要研究结果如下:(1)40株阪崎克罗诺杆菌MLST和ERIC-PCR分型结果显示:MLST方法可将40株菌分为23个ST(Sequence type)型,以ST1、ST4和ST93等型别比较常见。研究检出13个新的ST型,分别为:ST441、ST442、ST443、ST444、ST445、ST446、ST447、ST448、ST449、ST450、ST451、ST452及ST453。结合ERIC-PCR聚类分析结果,研究选取菌株35-15-1(ST4)、36-8-1(ST4)、6-16(2)(ST4)、2-9(1)(ST4)、12-12(2)(ST93)用于细胞试验。(2)阪崎克罗诺杆菌对HBMEC和U251细胞的侵袭和穿胞试验结果表明:所有供试菌株均能侵袭并穿过该两种细胞,ST4型菌株36-8-1对2种细胞的侵袭能力均最强,侵袭率分别为0.11%和0.0076%,与对照菌株(ATCC BAA-894)相比具有显著性差异。ST4型菌株35-15-1穿过两种细胞的能力最强,6 h时,该菌株对HBMEC的穿胞率高达0.23%。采用透射电镜法对被侵袭后的细胞和细菌的相对位置进行观察后,我们发现细菌分别存在于细胞外部、细胞膜上及细胞内部,表明源自于婴幼儿配方粉和米粉的阪崎克罗诺杆菌能够穿过血脑屏障主要组成细胞。(3)ELISA法测定TNF-α和IL-1含量的试验表明,所有供试菌株作用于HBMEC和U251细胞时均能导致细胞因子TNF-α和IL-1含量增加。ST4型菌株36-8-1作用于HBMEC和U215细胞后,细胞分泌的TNF-α和IL-1含量较高,与对照菌株ATCC BAA-894相比均有显著的差异。初步阐明阪崎克罗诺杆菌侵入血脑屏障主要细胞时,脑脊液中的TNF-α和IL-1水平会增高。(4)LDH释放活性试验结果表明:随着阪崎克罗诺杆菌侵袭细胞时间的增加,HBMEC和U251细胞LDH释放活性也会随之增加,两种细胞的受损程度随着侵袭时间的延长而增加,血脑屏障存在被严重破坏的可能性。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：TS201.3;R742.9

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