大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin L与p-JNK信号分子调控细胞凋亡的相关性研究

发布时间：2017-12-18 09:22

  本文关键词：大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin L与p-JNK信号分子调控细胞凋亡的相关性研究

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【摘要】：目的:脑缺血再灌注损伤的机制与细胞凋亡息息相关。许多学者已证实,溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)与JNK信号通路均对细胞凋亡发挥着重要作用。但二者对细胞凋亡的调控是否存在相关性,目前尚无研究报道。本实验探讨大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin L与JNK信号通路中p-JNK信号分子调控细胞凋亡的相关性,以期为缺血性脑卒中的治疗提供潜在的分子机制。方法:选用Longa线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。实验动物选用清洁级健康雄性Sprague-Daeley(SD)大鼠(216只),体重控制在260~300g,周龄均在10~12周。按随机原则将实验动物分成四个大组,即假手术组、脑缺血后再灌注模型组、p-JNK抑制剂组(SP600125)、Cathepsin L抑制剂组(Z-FY-DMK)。各组大鼠又以缺血后再灌注时间点分成2h、6h、12h、24h亚组。假手术组线栓插入血管深度为8~10mm,未造成大脑中动脉闭塞,其余操作与模型组一致。两个抑制剂组分别于缺血前30分钟侧脑室内注入JNK特异性抑制剂SP600125(30ug/10ul*10ul)、Cathepsin L特异性抑制剂Z-FY-DMK(20ug/1ul*5ul),留针10分钟,假手术组及模型组中分别注入10ul的DMSO溶液。各组大鼠数量为假手术组、模型组、SP600125干预组、Z-FY-DMK干预组中2h、6h、12h亚组各12只大鼠、24h亚组各18只。每个亚组中各取12只大鼠分别行TUNEL法凋亡细胞计数、westernblotting蛋白检测,另24小时亚组中再各取6只行ttc染色。本实验结果可得:1.实验模型制作成功率为83.72%。2.sp600125干预组、z-fy-dmk干预组各时间点神经功能缺损评分较模型组相应时间点明显降低(p0.01)。3.模型组与干预组脑组织可见大小不等苍白色梗死灶,假手术组未见明显梗死灶。sp600125干预组大鼠相对梗死体积为15.27±1.28%,z-fy-dmk干预组大鼠相对梗死体积为14.80±1.64%,模型组大鼠相对脑梗死体积为28.05±1.04%,两个干预组大鼠脑梗死体积均较模型组明显减少(p0.01)。4.tunel法检测各组大鼠右侧大脑缺血皮质区凋亡细胞表达,假手术组可见极少量凋亡细胞表达;模型组2h可见较多凋亡细胞表达,6h、12h呈增高趋势,24h达高峰,模型组各时间点凋亡细胞数与假手术组相比明显增多(p0.01);sp600125及z-fy-dmk干预组各时间点凋亡细胞表达均较模型组相应时间点减少(p0.01)。5.westernblotting检测各组大鼠大脑缺血侧皮质区cathepsinl表达,假手术组可见极少量cathepsinl蛋白表达;模型组cathepsinl在2h表达最少,6h开始增多,12h达高峰,24小时较12h稍下降,模型组各时间点cathepsinl表达均较假手术组明显增多(p0.01)。6.westernblotting检测各组大鼠大脑缺血皮质区p-jnk蛋白表达,假手术组可见极少量p-jnk蛋白表达;模型组2h、6h、12h、24h均可见p-jnk表达且与时间呈依赖关系,2h表达最低,6h、12h呈上升趋势,24h达最高峰,模型组各时间点p-jnk蛋白表达均较假手术组明显增多(P0.01)。7.Z-FY-DMK干预组中各时间点Cathepsin L蛋白表达较模型组明显减少(P0.01)。Z-FY-DMK组2h、6h、12h、24h亚组中p-JNK蛋白表达较模型组明显下降(P0.01)。8.SP600125干预组各时间点p-JNK蛋白表达均较模型组模型减少。SP600125干预组2h、6h、12h、24h亚组中Cathepsin L蛋白表达与模型组比较无显著差异(P0.05)。9.运用Spearman秩相关非参数检验统计方法得出,模型组Ca-thepsin L与p-JNK蛋白之间存在正相关(r=0.754,P=0.001),Z-FY-DMK干预组中Cathepsin L与p-JNK蛋白存在正相关(r=0.813,P=0.001),提示Cathepsin L与p-JNK蛋白之间存在正相关关系。结论:1.Cathepsin L可能位于p-JNK信号分子上游共同调控细胞凋亡。2.Cathepsin L特异性抑制剂可抑制Cathepsin L、p-JNK蛋白表达,减少脑梗死体积、减少凋亡细胞数、改善神经功能评分,具有神经保护作用。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

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2 王宇;高毅;俞金龙;黄宇琦;蒋晓青;;IFN-α对大鼠肝纤维化间质胶原酶基因表达的调控[J];世界华人消化杂志;2001年01期

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本文编号：1303635