人工合成多肽降解α-突触核蛋白对帕金森病的治疗作用

发布时间：2018-01-17 20:16

  本文关键词：人工合成多肽降解α-突触核蛋白对帕金森病的治疗作用　出处：《重庆医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：随着研究深入,越来越多的证据表明：α-突触核蛋白纤维性聚集体的产生是帕金森病发病的一个关键环节且大量的科学研究结果证实降低α-突触核蛋白表达水平可有效的、特异性的治疗帕金森病,然而当其转为临床应用时却出现了很大阻碍。本论文通过人工合成多肽Tat-βsyn-degron,观察其是否可通过蛋白酶体系统直接降解内源性α-突触核蛋白；并进一步研究该多肽是否对帕金森病具有保护作用及作用机制,为临床帕金森病的治疗提供新的理论基础和治疗方案。方法：1.多肽的构建和验证：利用p-突触核蛋白的第36-45个氨基酸可以高效特异地与α-突触核蛋白结合的特点,及近来研发出的可通过蛋白酶体途径快速且可逆的降解内源性α-突触核蛋白的特性,合成实验肽Tat-βsyn-degron和相应的对照肽Tat-βsyn。原代培养的大鼠皮层神经元给予不同浓度(5μM～50μM)的实验肽(Tat-βsyn-degron peptide)和对照肽fat-βsyn peptide (50μM)处理24hrs,用免疫印迹的方法检测α-突触核蛋白表达的变化；应用蛋白酶抑制剂MG132 (10μM)处理大鼠皮层神经元24hrs,以探讨人工合成的实验肽对α-突触核蛋白的作用及其机制；2.用1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+) (20μM)处理中脑腹侧神经元48hrs,将其作为研究多巴胺能神经元的神经元载体。用实验肽(Tat-βsyn-degron peptide) (25μM)和对照肽Tat-βsyn peptide (25μM)处理48hrs,后通过免疫印迹实验方法检测α-突触核蛋白和酪氨酸羟化酶(TH)的表达变化；3.构建帕金森病动物模型,将C57BL/6(20-25g)小鼠随机分为四组：Con组(Saline)、慢性MPTP组(MPTP),慢性MPTP加实验肽组(MPTP +Tat-βsyn-degron)、慢性MPTP加对照肽组(MPTP+Tat-βsyn)。每天给予腹腔注射帕金森毒性药物1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),连续5天,而对照组给予等量的生理盐水。实验肽(Tat-βsyn-degron peptide) (6μmol/kg)和对照肽(Tat-psyn peptide) (6μmol/kg)每12hr给药一次,与MPTP同日给药,且在MPTP给药完成后继续给药7天。所有实验鼠给药完成后通过：1)平衡疲劳转动棒行为学测试,检测多肽对帕金森病样行为的改善作用；2)免疫印迹实验检测纹状体内α-突触核蛋白以及酪氨酸羟化酶(TH)表达的变化；3)免疫组化实验检测纹状体和黑质区酪氨酸羟化酶(TH)的表达变化。结果：1.人工合成的多肽可以通过蛋白酶体途径有效的降解内源性α-突触核蛋白,且具有剂量依赖性和时间依赖性；2.体外实验研究发现,实验肽可以有效降解内源性α-突触核蛋白的水平,对MPP+所致多巴胺能神经元毒性损伤具有保护作用；然而对照肽虽在降解α-突触核蛋白方面未能发挥效能,但是却表现出了微弱的神经元保护作用,我们推测这一神经元保护效能可能是由于对照肽抑制了α-突触核蛋白的聚合。3.体内实验研究表明：1)实验肽明显降解了纹状体内的α-突触核蛋白,而对照肽并未发挥此作用；2)实验肽对MPTP所诱导的多巴胺能神经元的损伤具有保护作用；3)实验肽可以有效改善MPTP所致的帕金森病模型鼠的行为学缺陷。结论：1.人工合成的多肽可以穿透细胞质膜,通过蛋白酶体系统有效的、高度特异性的降解内源性α-突触核蛋白；2.人工合成的多肽可以在体内及体外对帕金森毒素所致多巴胺能神经元的损伤起到保护作用。
[Abstract]:AIM : To study the effect and mechanism of 伪 - synuclein on Parkinson ' s disease . Conclusion : 1 . The synthetic peptide can effectively degrade the level of 伪 - synuclein in striatum , and it has protective effect on the damage of dopaminergic neurons induced by MPTP .

【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.5

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本文编号：1437803