雷帕霉素缓释系统的构建及对胶质瘤作用的体外研究

发布时间：2018-02-04 22:07

  本文关键词： 胶质瘤 雷帕霉素 静电纺丝 局部释放 细胞活性　出处：《山东大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究目的以聚氧化乙烯/外消旋聚乳酸(PEO/PDLLA)为缓释载体材料,制作安全有效的搭载雷帕霉素(Rapa)药物的缓释系统,使药物缓慢平稳的从载体中释放,减少药物突释现象对局部神经系统的副作用,通过体外细胞活性实验探究对U87及U251胶质瘤细胞的抗肿瘤作用。方法(1)通过静电纺丝技术制作不同材料配比的未载药纤维膜以确定最佳材料配比后制作加载含有不同药物浓度PEO/PDLLA-Rapa载药纤维膜,应用扫描电镜(SEM)对纺丝纤维进行表征观察;采用X线衍射(XRD)及傅立叶转换红外光谱(FT-IR)分析雷帕霉素在载药纺丝纤维中的状态;测量纤维膜的水接触角评价载药纤维的亲水性及疏水性。(2)分析纤维膜中药物的包封率及载药量。将一定量不同浓度雷帕霉素的载药纤维膜放入含有5mL磷酸盐缓冲液(PBS)的15mL离心管中,固定于37℃,转速为60rpm/min的恒温水浴摇床中。在特定的时间段更换PBS缓冲液,采用高效液相色谱法(HPLC)测定不同时间段内PBS中药物的含量。根据不同缓释时间段内Rapa的量及累计药物缓释量得出药物缓释曲线。并在持续放置3d及7d时取出纤维膜通过SEM观察纤维的降解状况。(3)将钻60消毒灭菌后的空白PEO/PDLLA、0.5%载药、1%载药及2%载药的PEO/PDLLA膜分别置于已移入U251及U87细胞贴壁后的96孔板中,每天更换培养液,将其放入培养箱中分别培养1、3、5、7天,在不同时间段后取出培养液和载药纤维,用CCK-8法测定细胞活性。结果在确定合适的材料配比后,电镜观察纤维表面光滑,直径相对均一稳定。纤维表面未见明显药物结晶。红外光谱证实在药物溶解于有机溶剂后及在静电纺丝过程中药物的功能性化学基团仍然存在未受影响。在XRD的结果中可发现由于加入的药物量在纤维膜中的比例很小,使其在纤维中未见明显结晶,混合后的纤维结晶度均低于各自材料本身的结晶度。纤维膜的降解过程也与缓释曲线较一致。三种载药纤维膜在体外细胞实验中均表现出一定的持续抑制肿瘤细胞增殖的能力,由于载药量的不同,表现出不同的释放速率及释放时间。其中2wt%载药膜表现出更稳定且持续的抗肿瘤活性,且突释现象不明显。结论应用可降解生物材料PEO/PDLLA制作搭载Rapa的药物缓释系统是切实可行的,其理化性能良好,在一定范围内增加载药量可延长药物的缓释时间且更加稳定。其中2%载药的纤维膜表现出更加稳定的药物释放及抗肿瘤活性,突释现象不明显,可作为胶质瘤手术后局部化疗的良好载体。
[Abstract]:Objective to prepare a safe and effective delivery system for rapamycin Rapa with poly (ethylene oxide) / racemic polylactic acid (PEO / PDLLAA) as sustained-release carrier. Drug release from the carrier slowly and steadily, reducing the drug release phenomenon on the local nervous system side effects. To explore the anti-tumor effect of U87 and U251 glioma cells in vitro. The unloaded fiber membrane with different ratio of materials was made by electrospinning technology to determine the best ratio of materials and then the film containing different concentration of PEO/PDLLA-Rapa was made. Scanning electron microscope (SEM) was used to characterize the spinning fiber. X-ray diffraction (XRD) and Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) were used to analyze the state of rapamycin in drug-loaded spinning fiber. Evaluation of hydrophilicity and hydrophobicity of drug-loaded fiber by measuring water contact angle of fiber membrane. The encapsulation efficiency and drug loading capacity of the drugs in the fiber membrane were analyzed. A certain amount of rapamycin loaded fiber membrane was put into a 15ml centrifuge tube containing 5 mL phosphate buffer solution (PBS). Fixed at 37 鈩，

本文编号：1491272