外源性调节性T细胞减轻小鼠脑出血后炎症并改善长期神经功能预后

发布时间：2018-02-13 17:17

本文关键词： CD4+CD25+调节性T细胞脑出血神经行为缺损脑水肿炎症反应　出处：《泰山医学院》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的 1、探讨CD4+CD25+调节性T细胞静脉输注移植对脑出血小鼠的脑保护作用。 2、研究CD4+CD25+调节性T细胞输注移植后脑出血小鼠脑组织中炎症细胞因子的变化，并探讨CD4+CD25+调节性T细胞在脑出血炎症反应中的可能保护作用机制。方法 1、免疫磁珠两步法提取健康成年昆明小鼠CD4+CD25+调节性T细胞。健康雄性昆明小鼠采用自体血注入法建立左侧基底节区脑出血模型，实验动物随机分为假手术组、脑出血组、PBS对照组（脑出血+与Tregs等体积的PBS静脉注射）、Tregs治疗组（Tregs静脉注射），PBS、Tregs于模型制作后2小时股静脉输注。分别于模型制作前1h和制作后2hn,各组小鼠动脉血压及血气；血肿扫描并常规HE染色大体观察；分别于模型制作后的第1d、3d、7d、14d、21d、28d5个时间点给予行为学评分，观察神经功能缺损；在术后1d、3d、7d干湿重法测定脑组织含水量。 2、免疫磁珠两步法提取健康成年昆明小鼠CD4+CD25+调节性T细胞。健康雄性昆明小鼠采用自体血注入法建立左侧基底节区脑出血模型，实验动物随机分为假手术组、脑出血组、PBS对照组（脑出血+与Tregs等体积的PBS静脉注射）、Tregs治疗组（Tregs静脉注射），PBS、Tregs于模型制作后2小时股静脉输注。各组动物于造模后第1d、3d、7d时断头取新鲜脑组织，生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定脑组织匀浆液中炎性细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平；于造模后第3d时断头取脑，制备脑组织石蜡切片，免疫组织荧光方法染色检测血肿周围脑组织中炎症因子IL-6、核转录因子NF-κB的表达。结果 1、各组动物术前1小时与术后2小时的动脉血压及血气分析结果无显著差异。假手术组未见明显神经功能缺损；脑出血组、PBS对照组神经行为缺损前三天较重，且第3d时最差，以后逐渐恢复，，与假手术组相比，1d、3d、7d、14d、21d时差异均有统计学意义(P＜0.05)；与脑出血组、PBS对照组相比，Tregs治疗组在1d、3d、7d、14d、21d时功能缺损明显减轻(P＜0.05)，至21d时与假手术组相比较差异已无统计学意义；脑出血组、PBS对照组各时间点差异不明显。脑出血组、PBS对照组、Tregs治疗组脑组织含水量在1d、3d、7d三个时间点均高于假手术对照组(P＜0.05)，且第3天时最高；Tregs治疗组在第1d、3d、7d时脑组织含水量低于PBS对照组及脑出血组，差异有统计学意义(P＜0.05)；脑出血组与PBS对照组间各时间点差别不显著。 2、脑出血组、PBS对照组及Tregs治疗组在1d、3d、7d时脑组织中炎症因子含量均明显高于假手术组(P＜0.05)，且第3天时表达最高；在1d、3d、7d时，Tregs治疗组炎症因子含量明显低于PBS对照组及脑出血组(P＜0.05)。与假手术组相比较，脑出血组、PBS对照组及Tregs治疗组血肿周围脑组织炎症因子IL-6及核转录因子NF-κB表达在3d时明显高于假手术组(P＜0.05)；Tregs治疗组表达量低于脑出血组、PBS对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 1、CD4+CD25+调节性T细胞静脉输注移植可减轻脑出血小鼠脑水肿，改善长期神经功能缺损，发挥脑保护作用。 2、CD4+CD25+调节性T细胞静脉输注移植可减少脑出血后小鼠血肿周围脑组织中炎症因子及核转录因子的表达，可能通过减轻炎症反应发挥脑保护作用，有望通过外源性调节性T细胞的输注，为改善脑出血后的长期神经功能缺损提供治疗依据。
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【学位授予单位】：泰山医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3

【参考文献】