法舒地尔抑制犬颈动脉支架内再狭窄新生内膜形成：Periostin的作用

发布时间：2018-02-27 02:09

  本文关键词： 支架内再狭窄 Periostin 法舒地尔 细胞外基质 动物模型 比格犬　出处：《泸州医学院》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：改进传统支架内再狭窄动物模型，克服传统模型中支架置入前没有血管粥样硬化病变基础，观察改进后模型的支架内再狭窄情况。同时，在支架置入术后急性期给予法舒地尔（Rho激酶抑制剂），观察Periostin与Rho激酶的表达变化及两者之间的关系。 方法：选取健康老龄雄性比格犬16只，基础饲料喂养1周后开始高脂饲料喂养，至颈部血管造影及支架置入术后改用基础饲料喂养至实验结束。先随机分为两大组，对照组（A组）仅暴露颈总动脉，实验组（E组）建立颈动脉粥样硬化模型（n=12）。再将实验组随机均分为B、C和D三组，B组不再接受任何处理，C、D两组接受颈动脉支架置入术，其中D组在术后给予每天静滴法舒地尔注射液6mg/kg，分早晚两次输入，共7天。所有实验动物在支架置入术前10分钟，术后10分钟及术后8周行颈动脉造影术，所得图片用于测量颈总动脉直径狭窄百分比，面积狭窄百分比，狭窄直径和参考直径，以评估模型支架内再狭窄情况及法舒地尔效果。支架置入术后8周取颈部血管标本，一部分用甲醛固定标本进行HE染色以进行组织形态学评估，另一部分放入液氮保存，应用定量RT-PCR法检测靶组织Periostin与Rho激酶的mRNA表达，应用Western Blot法检测靶组织Periostin与Rho激酶的蛋白表达。同时，在血管粥样硬化造模前，支架置入术前，术后2天、7天、4周、8周时间点取外周静脉血，应用ELISA法检测血清Periostin的表达水平。 结果： 1、颈部血管造影结果显示颈总动脉粥样硬化造模8周后E组比A组最小管径显著缩小，狭窄率显著增大。支架置入术后10分钟C、D组管腔通畅，贴壁良好，管腔狭窄解除。术后8周C组狭窄直径也明显小于D组，但直径狭窄百分比显著高于D组，提示法舒地尔组较支架组管腔狭窄程度减轻。 2、组织形态学分析结果显示B、C两组的内膜厚度、面积及狭窄率均显著高于A、D两组，提示B、C两组的新生内膜增厚明显；D组的狭窄率明显比A组高，但显著低于B、C两组，提示法舒地尔对新生内膜的增生有抑制作用。 3、定量RT-PCR检测结果显示造模后B、C组中Periostin与Rho激酶的mRNA表达均有升高，但C组升高有统计学意义；与C组相比，D组中的Periostin与Rho激酶的mRNA表达均有下降，其中Rho激酶的mRNA下降有统计学意义，提示法舒地尔能够显著抑制Rho激酶mRNA的表达，同时可能有抑制Periostin的mRNA表达的趋势。Periostin与Rho激酶mRNA的Pearson相关系数r=0.595，p=0.015，提示两者呈正相关关系。 4、 Western Blot定量分析结果显示造模后B、 C组中Periostin与P-MYPT1-Thr696（代表Rho激酶活性）的蛋白表达均有升高，但C组升高有统计学意义；与C组相比，D组中的Periostin与P-MYPT1-Thr696的蛋白表达均有下降，其中P-MYPT1-Thr696的蛋白下降有统计学意义，提示法舒地尔能够显著抑制Rho激酶蛋白的表达，同时可能有抑制Periostin蛋白表达的趋势。Periostin与P-MYPT1-Thr696蛋白的Pearson相关系数r=0.810p=0.000，提示两者呈高度正相关关系。 5、ELISA分析结果提示时间因素对Periostin血清浓度表达的影响有显著意义，说明不同时间点检测的Periostin血清浓度至少在两个时点上是不同的；时间与组别间的交互作用对Periostin血清浓度影响也有显著性。固定时间因素，分析不同组别动物血清Periostin浓度可发现B、C和D组的Periostin浓度显著升高，D组的Periostin浓度较C组显著减少，提示血管经动脉粥样硬化造模或支架置入后血清Periostin表达上调，且法舒地尔可以抑制血清Periostin表达。但各时间点不同组别之间对比分析可发现术后2天与7天时CD组间的统计p值分别为0.028与0.036，即D组Periostin血清浓度明显下调；术后4w与8w时CD组间的统计p值分别为0.759与0.420，即法舒地尔用药停止后Periostin血清浓度在C组与D组间无统计学差异。这提示在法舒地尔用药期间，Periostin浓度显著下调，但停药后Periostin浓度又回升。 结论： 1、在传统支架内再狭窄动物模型的基础上，建立支架置入前靶血管粥样硬化动物模型，结合颈动脉支架置入术操作指南，围手术期给予抗血小板聚集药物，从而科学合理地修改了传统支架内再狭窄动物模型，为研究支架内再狭窄的病理生理机制提供更多有价值的参考。 2、支架置入后血管管腔内有新生内膜生成，管腔逐渐狭窄，术后短期给予法舒地尔（Rho激酶抑制剂）可抑制新生内膜形成，阻止管腔狭窄。 3、法舒地尔在用药期间可抑制血清中Periostin的表达，但停药后血清Periostin表达回升，且术后8周（停药后7周）组织中Periostin表达与血清Periostin表达结果一致，说明法舒地尔可以抑制Periostin表达的上调，但这可能并不是法舒地尔抑制新生内膜的关键或唯一因素。 4、Periostin与Rho激酶均可能参与动脉粥样硬化或支架内再狭窄的发展过程，且两者在组织中的表达具有高度正相关性，结合法舒地尔组血清中Periostin表达变化规律，，提示Periostin可能通过Rho/ROCK信号通路来参与支架内再狭窄的形成。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3

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本文编号：1540652