TSPO在脑出血后的表达及其配体依替福辛脑保护作用的初步研究

发布时间：2018-03-25 02:41

本文选题：脑出血　切入点：TSPO　出处：《第三军医大学》2016年硕士论文

【摘要】：脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH),为卒中的一种亚型,其发病率高,占所有卒中的第二位,每年全球约有两百万例脑出血发生。脑出血发病急骤,病情变化快且凶险,具有相当高的致残、致死率,极大威胁人类的健康。目前仍缺乏有效的治疗干预措施。脑出血的损伤机制除了形成占位效应的血肿所带来原发性损伤,更包括如血液降解产物毒性、炎症、水肿等后续继发性损伤。近年有关实验研究表明,神经炎症反应在ICH后脑损伤进展过程中为一个重要的部分。炎症反应在脑出血后迅速发生,发生发展机制涉及到原位小胶质细胞的激活、外周白细胞渗透侵入,伴随多种炎症介质大量的产生,加重了脑损伤。由于参与的细胞及细胞因子众多,它们之间相互作用、调节,又有各自的作用,存在错综复杂的关系。因此研究ICH后神经炎症反应相关损伤及寻找安全有效的治疗措施显得十分重要。转运蛋白18k Da(Translocator Protein 18 k Da,TSPO),曾也叫外周型苯二氮卓类受体(Peripheral Benzodiazepine Receptor,PBR)。TSPO广泛分布于全身多处组织,在正常状态下的脑组织中,TSPO主要表达在胶质细胞中,并且含量较低。当处于缺血缺氧、炎症、神经毒性等病理状态时,TSPO伴随着胶质细胞的激活,敏感又迅速地表达上调。并且已在多种中枢神经系统疾病观察到这一现象,所以,TSPO被看作是神经炎症反应的一个标志物。因此,将TSPO配体用放射性元素标记后作为示踪剂,通过PET成像,从而作为一种能够深入探索、活体并实时研究神经炎症反应在中枢神经系统疾病过程及评价治疗效果的新手段。从目前现有的研究来看,TSPO及其配体已表现出在临床上运用的良好前景。但目前TSPO的表达及其配体的运用在脑出血中领域尚无相关实验研究有报道。此外,TSPO参与多种细胞生理功能,其中最主要为参与胆固醇等脂类物质的转运,作为限速步骤,调控并促进神经类固醇的合成。TSPO的部分内源性及外源性配体,在离体或在体实验中已证实能够促进神经类固醇增多,并能减轻神经炎症反应,作为潜在的治疗手段。依替福辛(Etifoxine,EFX),作为TSPO配体中的一种,是一种临床上使用的抗焦虑药物。依替福辛在多发性硬化动物模型中,表现出抑制外周免疫细胞入侵、降低炎症产物水平、促进胶质细胞再生的作用,并改善了神经运动功能障碍。但目前确切的作用机制尚未阐明。本实验建立了小鼠实验性脑出血动物模型,第一部分将初步研究脑出血后转运蛋白TSPO的表达情况及与炎症反应的关系,以为将来脑出血后活体成像、神经炎症反应的在体监测打下基础,第二部分研究TSPO的外源性配体依替福辛在脑出血后可能发挥的抑制炎症反应的神经保护作用,并为脑出血综合治疗提供新的方法。一、TSPO在脑出血后表达的初步研究目的通过建立小鼠实验性脑出血动物模型,检测脑出血后血肿周围组织中TSPO的表达情况及部位,了解TSPO与脑出血后神经炎症反应的关系。方法实验总共分为三部分。第一部分建立自体血注入法小鼠实验性脑出血模型,将实验动物分为假手术组、15μl出血量组、25μl出血量组,于术后1d进行神经功能评分及磁共振扫描。第二部分将留取上述各组小鼠脑组织,并留取25ul出血量组小鼠在术后12h,1d,3d,5d的脑组织,用于Western Blot检测TSPO的表达。第三部分将25ul出血量组小鼠脑组织在术后12h,1d,3d,5d用于免疫荧光组化检测TSPO在小胶质细胞、星形胶质细胞上的表达。结果1.磁共振结果成功建立小鼠实验性脑出血模型,在术后1d时,25μl出血组小鼠的神经功能障碍明显重于15μl出血组小鼠。2.Western Blot结果表明,15μl出血量组及25μl出血量组TSPO表达较Sham组明显升高,25μl出血量组的TSPO表达多于15μl出血量组;25μl出血量组在术后12h时,TSPO表达增多不明显,但在术后1d、3d、5d逐渐增加。3.免疫荧光结果表明,TSPO的表达在术后明显增加,主要表达在激活的小胶质细胞和星形胶质细胞上。结论TSPO在小鼠脑出血后的表达有明显增多,表达量与术后时间、出血量有一定关系,还可能与疾病严重程度有关,TSPO主要表达在小胶质细胞和星形胶质细胞上,提示了TSPO的表达可能与脑出血后神经炎性反应有密切的关系。二、Etifoxine在脑出血后脑保护作用的初步研究目的通过建立小鼠实验性脑出血动物模型,观察小鼠脑出血后的脑损伤表现,初步探讨依替福辛对脑出血的神经保护作用。方法1.将实验动物随机分成假手术组(Sham)、脑出血组(ICH组)、脑出血+依替福辛组(ICH+EFX组)。ICH+EFX组于术后6h完成首次给药,采用腹腔注射EFX(50mg/kg),并每天给药,总共5日。Sham组和ICH组给予等体积溶剂作为对照。2.各组于术前、术后每日给药前称量并记录体重。3.各组于术后1d、3d、5d进行神经运动功能障碍评分。4.采用干湿法测量脑组织含水量及伊文思蓝法检测血脑屏障通透性。5.采用ELISA测量各组血清中TNF-α及IL-1β水平。结果1.ICH可导致小鼠体质量下降,引起急性脑水肿、血脑屏障破坏、神经炎症反应及运动神经功能障碍。2.依替福辛缓解了ICH后小鼠体质量的降低,减轻了脑组织水肿,降低了IL-1β炎症因子水平,改善神经功能障碍,但对于血脑屏障通透性的保护却不明显。结论TSPO配体依替福辛具有神经保护作用,可缓解小鼠ICH后体质量下降、脑水肿程度,降低外周血肿炎症因子水平,并一定程度改善小鼠神经运动功能缺损。可能是未来脑出血综合治疗的一种选择。
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【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.34

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