BMSCs条件培养液诱导小胶质细胞分泌精氨酸酶1的初步研究

发布时间：2018-03-28 15:44

  本文选题：BMSCs　切入点：小胶质细胞　出处：《中国修复重建外科杂志》2017年12期

【摘要】：目的初步探讨BMSCs条件培养液对小胶质细胞(microglia,MGs)激活及其分泌精氨酸酶1(arginase 1,Arg1)的影响。方法取4周龄SD大鼠股骨和胫骨骨髓,采用差速贴壁法分离培养原代BMSCs,行Vimentin免疫荧光染色鉴定。取新生3日内SD大鼠全脑,采用胰蛋白酶消化法分离培养原代MGs,行Iba1免疫荧光染色鉴定。收集对数生长期BMSCs培养液制备BMSCs条件培养液,取原代MGs,分别使用含BMSCs条件培养液的DMEM/F12培养基(实验组)和普通DMEM/F12培养基(对照组)培养。培养48 h后采用倒置相差显微镜观察MGs的形态改变;Iba1免疫荧光染色观察MGs激活状态;Iba1和Arg1免疫荧光双标染色及Western blot检测MGs中Arg1的表达。结果倒置相差显微镜观察示BMSCs约14 d进入对数生长期,Vimentin免疫荧光染色结果示98%以上细胞呈阳性反应;MGs约21 d进入对数生长期,Iba1免疫荧光染色结果示约80%细胞呈阳性反应。倒置相差显微镜观察示实验组MGs被激活,激活后的MGs胞体增大、突起变短、呈阿米巴样变化。免疫荧光染色示实验组Iba1阳性细胞显著多于对照组,比较差异有统计学意义(t=0.007,P=0.000);免疫荧光双标染色示实验组Iba1和Arg1双阳性细胞显著多于对照组,比较差异有统计学意义(t=0.007,P=0.000);Western blot示实验组Arg1蛋白相对表达量显著高于对照组,比较差异有统计学意义(t=0.001,P=0.000)。结论 BMSCs条件培养液可激活MGs,并促进MGs表达Arg1。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of BMSCs conditioned medium on the activation of microglia microglia and the secretion of argininase 1(arginase 1 Arg 1. Methods the bone marrow of femur and tibia of 4-week-old SD rats was obtained. Primary BMSCs were isolated and cultured by differential adherent method and identified by Vimentin immunofluorescence staining. The whole brain of SD rats was obtained within 3 days after birth. Primary MGs were isolated and cultured by trypsin digestion and identified by Iba1 immunofluorescence staining. The BMSCs medium of logarithmic growth phase was collected to prepare the conditioned medium of BMSCs. The primary MGs were cultured in DMEM/F12 medium containing BMSCs conditioned medium (experimental group) and normal DMEM/F12 medium (control group) respectively. After 48 h culture, the morphologic changes of MGs were observed by inverted phase contrast microscope. The expression of Arg1 in MGs was detected by double immunofluorescence staining and Western blot. Results the expression of Arg1 in MGs was detected by inverted phase contrast microscope. Results the results of immunofluorescence staining showed that more than 98% of the cells were positive in the logarithmic growth phase of BMSCs. The results of Iba1 immunofluorescence staining showed that about 80% of the cells were positive in the logarithmic growth phase. The inverted phase contrast microscope showed that MGs was activated in the experimental group. After activation, the MGs cell bodies increased and the processes became shorter, showing amoeba like changes. Immunofluorescence staining showed that the number of Iba1 positive cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group. The results showed that the expression of Arg1 protein in the experimental group was significantly higher than that in the control group, and the relative expression of Arg1 protein in the experimental group was significantly higher than that in the control group, and the expression of Arg1 protein in the experimental group was significantly higher than that in the control group, and the expression of Arg1 protein in the experimental group was significantly higher than that in the control group. Conclusion the conditioned medium of BMSCs can activate MGs and promote the expression of Arg1 in MGs.
【作者单位】： 成都中医药大学基础医学院;成都中医药大学针灸推拿学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81603537、81704160) 中国博士后科学基金(2017M612928) 四川省科技厅国际科技合作与交流项目(2017HH0004) 四川省教育厅项目(17ZA0163)~~
【分类号】：R741

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本文编号：1676962