大鼠急性CO中毒迟发性脑病海马AP-1与HO-1的表达

发布时间：2018-03-29 16:55

本文选题：CO中毒　切入点：凋亡　出处：《西南医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:检测急性一氧化碳中毒后不同时间点大鼠海马神经元活化蛋白-1(AP-1)及血红素加氧酶-1(HO-1)的表达变化,探讨AP-1及HO-1两种蛋白在急性一氧化碳中毒后导致迟发性脑病的作用及机制,为研究DEACMP提供实验基础。方法:筛选156只雄性健康合格的SD大鼠,通过随机数字表抽取的方法将它们分成三组:DEACMP组(CO组)、空气对照组(AC组)、空白对照组(BC组),其中CO组和AC组各有60只,BC组36只,三组大鼠再按照中毒后1d、3d、1W、2W、3W、4W六个时间点平均分为六个亚组,CO组、AC组各亚组10只,BC组各亚组6只。DEACMP组使用腹腔多次间隔注射一氧化碳的方法制备DEACMP模型,空气对照组采用相同的方法注射等体积的空气,对空白对照组不进行任何干预。应用Morris水迷宫实验,即包括定位航行实验和空间探索实验两部分,分别检测三组大鼠染毒前、染毒后1W、2W、3W、4W的平均逃避潜伏期和平台象限运动时间的长短,从而客观分析各组大鼠的学习记忆和定位认知能力。采用HE染色观察大鼠海马CAl区病理变化,应用免疫组化SP法检测大鼠海马CAl区AP-1及HO-1的表达情况,采用Western-blot法半定量分析海马区AP-1的表达水平,采用TUNEL染色法计数海马CAl区凋亡神经元。结果:1、DEACMP大鼠模型的建立:CO组大鼠染毒后出现烦躁、撞笼、呼吸急促、拒食少动、嗜睡等各种急性一氧化碳中毒的临床症状,口唇、趾端以及皮肤黏膜呈现出典型的樱桃红色,中毒严重的部分大鼠可出现昏迷、抽搐甚至死亡。AC组、BC组大鼠没有出现明显异常活动。2、morris水迷宫实验:1)定位航行(平均逃避潜伏期):co组、ac组以及bc大鼠的平均逃避潜伏期在染毒前及染毒后1w差异没有统计学意义(p0.05);co组染毒后2w(21.26±3.22)、3w(23.17±3.92)、4w(22.53±2.84)平均逃避潜伏期延长,与ac组、bc组比较差异有统计学意义(p0.05)。2)空间探索(平台象限运动时间):三组大鼠的平台象限运动时间在染毒前及染毒后1w差异没有统计学意义(p0.05);co组的平台象限运动时间在染毒后2w(31.12±2.05)、3w(28.03±3.30)、4w(21.37±2.76)逐渐缩短,与ac组、bc组比较差异有统计学意义(p0.05)。3、he染色情况:ac组、bc组各时间点海马cal区细胞形态正常,细胞排列整齐,细胞膜完全,边界清楚;co组大鼠海马cal区神经元数量减少、排列极为不规整、相互之间间隙增大,细胞核出现深染、不同程度固缩及碎裂。4、免疫组化结果:1)ap-1:ac组及bc组各亚组的ap-1蛋白表达较少,且差异没有统计学意义(p0.05),co组各时间点表达的ap-1蛋白(分别为3.5±0.51、7.92±0.88、6.4±1.17、5.25±1.01、4.36±1.32、3.74±0.69)均高于ac组及bc组,3d达峰值,且与组内1d、1w、2w、3w、4w比较差异均有统计学意义(p0.05)。2)ho-1:ac组及bc组各亚组的ho-1蛋白表达较少,且差异没有统计学意义(p0.05),co组各时间点表达的ho-1蛋白(分别为3.65±0.43、9.06±0.86、6.86±0.57、5.00±0.77、4.2±0.72、3.72±0.59)均高于ac组及bc组,3d达峰值,且与组内1d、1w、2w、3w、4w比较差异均有统计学意义(p0.05)。5、ap-1的western-blot结果:在ac组、bc组大鼠海马区有少量表达,co组大鼠海马的ap-1蛋白在1d(0.93±0.07)时增多,3d时(1.71±0.10)达高峰,1W(1.45±0.10)开始下降,至4W时(0.65±0.10)表达仍高于AC组(0.39±0.04)和BC组(0.50±0.07)。CO组各时间点AP-1蛋白的表达趋势与免疫组化结果一致。6、TUNEL染色结果:AC组、BC组各亚组大鼠海马CAl区神经元有少许凋亡细胞,CO组凋亡神经元明显高于AC组、BC组,凋亡指数(分别为7.49±0.65、15.63±1.14、20±1.56、18.22±1.00、12.41±1.19、7.86±1.01)呈逐渐增高,于染毒后1W达峰值,之后逐渐下降的趋势,且染毒后1W、2W分别与组内其余各时间点比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1、多次间隔腹腔注射CO的方法是建立DEACMP模型的理想方法,具有操作简单安全、所需CO剂量少、染毒剂量深度容易控制等优点。2、通过Morris水迷宫客观反应大鼠的认知能力,结合大鼠的行为变化和血液中的Hb CO水平综合判断CO组大鼠是否发生了迟发性脑病。3、AP-1可能通过参与调节凋亡相关靶基因HO-1的表达,引起一氧化碳中毒后神经元的凋亡,从而推助迟发性脑病的发生。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of activated protein - 1 ( AP - 1 ) and heme oxygenase - 1 ( HO - 1 ) in hippocampus of rats after acute carbon monoxide poisoning . There was no significant difference between the two groups ( P < 0.05 ) . There was no significant difference between the two groups ( P < 0.05 ) . The expression of AP - 1 protein in the group of co - group was 3 . 5 卤 0 . 51 , 7 . 92 卤 0 . 88 , 6 . 4 卤 1.17 , 5 . 25 卤 1.01 , 4 . 36 卤 1 . 32 , 3 . 74 卤 0.69 .

【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R595.1;R747.9

【参考文献】