TGFB1、ENG、ACVRL1基因多态性AVM相关研究及贝伐单抗对GBM治疗效果的meta分析

发布时间：2018-04-02 03:20

本文选题：脑动静脉畸形　切入点：TGFB1　出处：《山东大学》2016年博士论文

【摘要】：第一部分TGFB1、ENG、ACVRL1基因多态性与AVM的相关研究目的：散发型脑动静脉畸形(Brain arteriovenous malformations, BAVM)是常见的脑血管发育畸形性疾病的一种。对AVM进行早期干预及提供更有效的治疗离不开对AVM发病机制的探索。而AVM的遗传易感性是研究的重点方向。如果要进行AVM的遗传易感性检测及预后评估,对与AVM密切相关的易感基因及SNP位点的寻找显的尤为重要,将有助于了解AVM发病及自然病程的生物学机制,进而可以进行风险分层并为制定个体化的治疗方案提供依据。TGFB1信号通路可以对血管的生成和功能产生影响。而TGFB需要其受体的配合才能发挥其生物学作用。由ENG编码的内皮因子(Endoglin)及ACVRL1编码的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶受体R3是TGFB受体的重要组成部分。在TGFB信号通路中,ENG与ACVRL1存在着协同作用。并且可能影响散发的AVM发生。目前尚缺乏基于中国汉族人群的TGFB信号通路相关基因多态性与散发AVM发病间的相互关系的研究。本课题拟通过对中国汉族人群中,TGFB1基因、ENG基因、ACVRL1基因多态性位点的分析检测,了解TGFB1、ENG、ACVRL1基因的SNP分布规律,应用遗传学分析方法探讨TGFB1、ENG、ACVRL1基因与中国汉族人群AVM的关系,解释AVM的遗传危险因素,为AVM的基因研究、治疗、预后等提供理论基础。研究方法：本研究选取散发AVM患者50例,正常对照120例。每位患者的诊断均经过DSA检查证实为AVM,均详细追问家族史,并行胸腹部CT等除外其他脏器AVM,以排除遗传性毛细血管扩张症(HHT)及其他遗传性疾病可能。对照组收集无重大疾病的及慢性病史的体检志愿者及轻度颅脑外伤患者,经颅脑MRI及胸腹CT排除AVM及其他器官可能存在的AVM。采集受试者静脉血,用于DNA的制备。提取受试者DNA后,应用PCR扩增目标基因,应用连接酶检测反应(ligase detection reaction, LDR)技术进行目标基因多态性的检测。获取目标基因多态性分布后,分析其与AVM发病见得相关性。结果：本组研究共纳入50例散发AVM患者及120例正常对照。其中50例AVM中,以AVM破裂为首发症状就诊者46例,占总例数的92%,位于幕上者为38例,占总例数的76%,位于大脑表浅部位者40例,占总例数的80%。1.TGFB1多态性分布rs2241716位点在AVM组与对照组中A/A、A/G、G/G基因型频率间无显著差别(X2=3.88, P=0.14)。AVM组与对照组中A和G等位基因频率间亦无显著差异(X2=0.99, P=0.32)。rs8105161位点在两组中C/C、C/T、T/T基因型频率间无显著差别(χ2=5.78,P=0.056)；C和T等位基因频率间亦无显著差异(x2=2.06,P=0.15)。2. ACVRL1基因多态性分布rs2071219位点A/A.A/G、G/G基因型频率在两组间无显著性差异(χ2=0.52,P=0.77)；G和A等位基因频率间亦无显著差异(X2=0.46, P=0.5)。rs706819的A/A、A/G、G/G基因型频率在两组间存在明显差异(χ2=9.4,P=0.009),但在等位基因频率中未发现存在差异(χ2=0.03,P=0.86)。杂合子模型(A/A VS A/G)分析发现对AVM的出现有保护作用(X2=6.42, P=0.01, OR=0.167,95%CI= (0.036-0.768))。rs2293094在AVM患者中未检测到G/G基因型,AVM组与对照组中A/A、A/G基因型频率间有显著性差异(χ2=10.52,P=0.005)。A和G等位基因频率在两组间亦存在显著差异(X2=8.65, P=0.003, OR=2.28,95%CI= (1.31-3.98)). rs11169953位点的T/T、C/T、C/C基因型频率在AVM组与对照组间存在明显差异(χ2=6.07,P=0.045)。C和T等位基因频率在两组间亦存在显著差异(X2=1.88, P=0.01, OR=1.88,95%CI= (1.16-3.05))。隐性模型对AVM发病存在影响(X2=5.23, P=0.022, OR=2.9,95%CI= (1.132-7.428))。rs706819、rs2293094、rs11169953三个位点的单倍体型分析显示：GGT单倍体型存在时,可降低AVM发生的风险(X2=13.808, P=0.0002, OR=0.279,95%CI= (0.138-0.565)); GAC单倍体型存在时,可增加AVM发生的风险(X2=8.21, P=0.004, OR=2.17,95%CI= (1.27-3.7))=3.ENG基因多态性分布rs1 1545664位点在AVM组与对照组中无A/A基因型,A/G、G/G基因型频率在两组间无显著性差异(χ2=2.91,P=0.08),A和G等位基因频率在两组间亦无显著差异(X2=0.42,P=0.1)。rs1998923位点中未检测到C/C基因型,C/T、T/T基因型频率在两组间无显著性差异(χ2=0.72,P=0.38)。C和T等位基因频率在两组间无显著差异(X2=0.77,P=0.43)。rs4837192位点未检测到G/G基因型,A/G、A/A基因型频率在两组间无显著性差异(χ2=0.028,P=0.87)。G和A等位基因频率在两组间无显著差异(X2=0.02,P=0.88)。rs1330684位点的G/G、A/G、A/A基因型频率间在AVM及对照组间无显著性差异(X2=2.51, P=0.29)。AVM组与对照组中G和A等位基因频率间无显著差异(χ2=0.0008,P=0.93)。4.各位点与AVM临床特点间的关系应用logistics回归分析寻找与破裂、位置关系等相关的因素,未发现上述10个SNP与AVM的破裂、位置(包括幕上下、表浅)等存在相关性(P0.05)。结论：本研究发现ACVRL基因的rs706819、rs2293094、rsl 1169953单核苷酸多态性与中国汉族人群的散发AVM存在相关性。并且rs706819、rs2293094、 rs11169953的GGT单倍体型可降低AVM发生的风险；GAC单倍体型存在时,可增加AVM发生的风险。这为预测AVM发生提供了可能的检测位点及理论基础。第二部分贝伐单抗对GBM治疗效果的meta分析目的：胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM),是作为胶质瘤中恶性程度最高的病理组织学类型,目前最有效的治疗仍是首先进行进行最大化的手术切除后进行放化疗。但是不能获得理想的治疗效果。胶质瘤的病理级别与肿瘤血管生成密切相关,VEGF是与胶质瘤血管生成密切相关细胞因子,可以进而促进肿瘤内血管的生成,改善肿瘤内缺氧状态,改善肿瘤营养供应,促进肿瘤的生长。针对VEGF的重要作用,其单克隆抗体贝伐单抗(Bevacizumab, BV)被用于复发GBM患者的治疗。虽然已有多个临床试验进行了贝伐单抗对新诊断原发GBM治疗效果的评价的,但是一线使用贝伐单抗用于治疗胶质母细胞瘤患者的效果目前尚不明确。为了更好地评估贝伐单抗联合放疗-替莫唑胺治疗新诊断的胶质母细胞瘤患者的疗效及分析贝伐单抗联合放疗-替莫唑胺是否会增加额外严重副作用,我们对已完成的贝伐单抗的临床试验进行了完善的系统综述及meta分析。研究方法：参考Cochrane meta分析手册,对生存数据进行相关的meta分析,参照手册规范进行数据文献的报告。文献检索数据库包括PubMed, Embase和Cochrane图书馆,检索时间截止至2016年5月1日。检索关键词为：bevacizumab, temozolomide, glioblastoma, radiotherapy。严格按照纳入标准,由三名独立的评价者进行文献检索、筛选及数据提取。提取数据主要包括总生存期(overall survival, OS)和无症状进展期(progression free survival, PFS)及不良反应事件的患者数。结果：本研究共纳入6篇文章进行meta分析,共包括2181名受试者,其中1068位GBM患者接受贝伐单抗/替莫唑胺/放疗,1113位GBM患者接受替莫唑胺/放疗。1.生存分析所有患者中,接受联合BV和替莫唑胺-放疗者,OS没有改善,汇总风险比为0.977(95% CIs 0.886-1.078; P=0.886)。而PFS却获得了明显的改善(汇总HRs=0.709,95% CIs 0.645-0.779；P0.001).有三项研究提供了GBM患者的MGMT (O6-methylguanine-DNA methyltransferase)甲基化状态的数据。BV组患者中,MGMT甲基化者共248例,未甲基化者469例,对照组数据分别为：248例及478例。BV组MGMT甲基化及未甲基化患者在接受贝伐单抗治疗后,未获得OS的明显受益,HRs分别为1.132(95%CIs 0.876-1.462；P=0.345)；1.018(95%CIs 0.879-1.179；P=0.345).不同MGMT甲基化状态的GBM患者接受BV治疗后,PFS却获得了明显的受益(HRs:0.769,95%CIs 0.604-0.978, P=0.032;0.675,95%CIs 0.466-0.979, P=0.038).2.不良反应事件分析在放化疗期间,两组血液系统不良反应的发生率没有显著性差异(RR 1.228, 95%CIs0.965-1.563,P=0.094).然而,在辅助治疗阶段,BV组患者患血液系统不良反应的风险更高(RR 1.311,95%CIs 1.051--1.634,P=0.016),特别是中性粒细胞减少症的发生率更高(RR 2.00,95%CIsl.18--3.391,P=0.01)BV组主要的三级或更高级别非血液系统不良反应主要有疲劳,高血压,出血,血栓,和伤口愈合相关并发症(包括伤口裂开,伤口感染),其汇总比率分别为12.4%(95%CIs 6.2%-18.6%),9.3%(95%CIs 3.5%-15.2%),2.6%(95%Cls 0.7%-4.5%),12.9%(95%CIs 10.6%-15.2%),3.1%(95%CIs 1.9%-4.3%)。结论：贝伐单抗治疗可以改善新诊断胶质母细胞瘤治疗效果,但是GBM患者并没有从贝伐单抗治疗中获得总生存期的延长。在接受贝伐单抗治疗的患者中,有更多的3级或更高级别的不良反应事件出现。
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【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.4

【参考文献】