MACF1在自噬促进胶质母细胞瘤迁移和侵袭中的作用

发布时间：2018-04-09 20:23

  本文选题：胶质母细胞瘤　切入点：自噬　出处：《南方医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：胶质瘤是中枢神经系统中最常见的原发恶性肿瘤,约占所有颅内原发恶性肿瘤的70%。在胶质瘤的WHO分型中,Ⅳ型胶质瘤,即胶质母细胞瘤(GlioblastomaMultiforme,GBM)恶性程度最高,具有相当高的复发率和致死性。目前临床上针对GBM普遍采用包含最大安全范围手术切除+替莫唑胺(temozolomide,TMZ)化疗+放疗的综合治疗方案(STUPP方案),但GBM患者预后仍很差,平均中位生存期只有15个月左右,2年生存率为27%。GBM在经过标准方案治疗后仍然复发并向周围组织侵袭是导致患者预后差的主要原因之一。GBM在其进展过程中出现的局部缺血缺氧及化疗药物TMZ的刺激作用等可诱导肿瘤细胞发生自噬,从而促进肿瘤细胞的生存。另外上皮细胞间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)被认为是上皮细胞来源的恶性肿瘤(包括GBM)细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程。在本研究前期实验中,我们已证实TMZ可诱导GBM发生自噬,并进而诱导GBM发生EMT,获得迁移和侵袭能力。另外,我们发现TMZ可以显著上调微管微丝交连蛋白(microtubule-actin crosslinking factor 1,MACF1,也称之为ACF7)的表达水平,而MACF1已在小鼠上皮组织中被证实与细胞迁移相关。因此,我们提出假说,TMZ等刺激作用通过诱导GBM发生自噬,进而诱导其MACF1表达水平上调,从而导致GBM发生EMT并获得迁移和侵袭能力。在本研究中,我们在胶质母细胞瘤细胞系U87和U251细胞上对此假说进行了探索。第一章MACF1在胶质母细胞瘤中的生物功能的初步研究方法:分别应用siRNA干扰序列和慢病毒载体干扰U87和U251中MACF1的表达,并用RT-PCR和Western Blot检测干扰效率。通过细胞计数、CCK8实验、细胞形态观察、划痕实验、Transwell小室迁移实验、Boyden小室侵袭实验、Western Blot和免疫荧光等实验,检测干扰MACF1后的U87和U251细胞的细胞表型和功能上的差异。结果:干扰U87和U251中MACF1的表达后,细胞增殖无明显差异(P0.05);细胞胞体长径变短,细胞凸起减少变短;细胞迁移能力下调(P0.001),侵袭能力下调(P0.05);在EMT相关蛋白中,上皮细胞表型标记物表达上调,间质细胞表型标记物表达下调,EMT转录因子表达下调。第二章自噬诱导U87细胞MACF1表达水平上调方法:分别用含雷帕霉素(rapamycin,RAPA,自噬诱导剂)和TMZ和氯喹(chloroquine,CQ,自噬抑制剂)的完全培养基持续作用于U87细胞,通过Western Blot检测各组MACF1表达水平。结果:RAPA和TMZ持续刺激U87细胞后,MACF1表达水平明显上调(P0.01)。通过CQ抑制自噬以后再用RAPA和TMZ刺激U87细胞,其MACF1表达水平相比未抑制自噬的细胞明显下调(P0.05),证实通过在U87胶质母细胞瘤细胞中诱导自噬流水平上调可诱导MACF1表达水平上调。第三章MACF1在自噬促进胶质母细胞瘤迁移和侵袭中的作用方法:应用慢病毒载体稳定干扰U87中MACF1的表达后,对U87细胞用RAPA诱导自噬流水平上调,并采用Transwell小室迁移实验、Boyden小室侵袭实验检测对干扰MACF1后的U87细胞诱导自噬流水平上调后其细胞迁移和侵袭的差异。结果:对未干扰MACF1表达的正常对照组U87细胞用RAPA诱导自噬流水平上调后,其细胞迁移能力和侵袭能力对比应用正常培养基的细胞明显上调(P0.01);对干扰MACF1表达的U87细胞用RAPA诱导自噬流水平上调后,其细胞迁移能力和侵袭能力对比未干扰MACF1表达的正常对照组明显下调(P0.001),证实MACF1在RAPA诱导U87细胞自噬流水平上调后促进其迁移和侵袭的过程中起重要作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.4

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本文编号：1727997