一种高效简便的原代神经元培养方法

发布时间：2018-05-01 11:21

  本文选题：皮质神经元 + 原代培养　； 参考：《神经损伤与功能重建》2016年06期

【摘要】：目的:建立一种简便高效的原代神经元培养方法。方法:出生12 h内的Wistar乳鼠,分离皮质后剪碎,0.25%胰酶消化30 min,漂洗后轻柔吹散细胞,过滤后1 000 rpm离心5 min,弃上清,加接种液吹匀后过滤,静置3~5 min,取上层液体计数并接种。接种后4、45、96 h全量换液,之后每3 d半量换液1次。培养第5天评估神经元,NSE染色、NMDAR1染色和台盼兰染色。结果:神经元纯度高(95%),死亡率低(5%),细胞形态好,交联充分,背景干净。结论:利用新生大鼠皮质建立了高质量、高产量、简便的神经元培养模型。
[Abstract]:Objective: to establish a simple and effective method for primary neuron culture. Methods: Wistar suckling rats were born within 12 hours. After separating the cortex and digesting 0.25% trypsin for 30 minutes, rinsing and gently blowing away the cells, filtering for 1 000 rpm, centrifuging for 5 minutes, dissolving the supernatant, adding the inoculant, blowing and filtering, resting for 3 minutes, then counting and inoculating the upper liquid. After inoculation, the whole fluid was changed from 45 to 96 hours after inoculation, and then changed once every 3 days and half a day. NSE staining and Trypan blue staining were evaluated on the 5th day of culture. Results: the purity of neurons was high, the mortality was low, the cell morphology was good, the cross-linking was sufficient, and the background was clean. Conclusion: a high quality, high yield and simple neuron culture model was established by using the cortex of newborn rats.
【作者单位】： 济南军区总医院;解放军第303医院;第三军医大学大坪医院野战外科研究所;
【基金】：十二五全军重点项目No.BWS11J062
【分类号】：R741

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