雷帕霉素对EAE小鼠Th17细胞的影响及其机制探讨
本文选题：雷帕霉素 + 多发性硬化 ； 参考：《河北医科大学》2016年硕士论文
【摘要】：目的:研究雷帕霉素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠脾组织中Th17细胞比例及HIF-1α、GLUT1表达水平的影响,初步探讨雷帕霉素对EAE小鼠的免疫调节作用和对Th17细胞分化的影响,以进一步阐明雷帕霉素的可能作用机制,为指导临床用药提供基础实验依据。方法:将C57BL/6小鼠随机分为Rapa组、EAE组和正常对照组,以MOG35-55为抗原免疫建立EAE模型,正常对照组不予免疫。免疫当天记为第0天,自免疫第1天开始给药,Rapa组小鼠给予雷帕霉素1mg/kg每日腹腔注射;正常对照组及EAE组小鼠每日给予等量生理盐水腹腔注射。观察小鼠的发病情况、体重变化及神经功能评分。于免疫后第20天处死小鼠。以HE染色观察小鼠脊髓组织炎性细胞浸润情况;流式细胞术检测小鼠脾组织Th17细胞比例;ELISA检测小鼠脾细胞培养液上清液中IL-17A表达水平;Real-Time PCR测定小鼠脾组织HIF-1α及GLUT1 mRNA的表达水平。结果:1各组小鼠临床表现:正常对照组小鼠无发病;Rapa组小鼠与EAE组小鼠相比,其发病率、体重减轻程度及免疫后第20天的神经功能评分均明显降低(P0.05)。2各组小鼠脾组织中Th17细胞比例比较:免疫后第20天,EAE组Th17细胞比例较正常对照组明显升高(P0.05),Rapa组Th17细胞比例较EAE组明显降低(P0.05)。3各组小鼠脾细胞培养液上清液中的IL-17A浓度比较:免疫后第20天,EAE组小鼠脾细胞培养液上清液中的IL-17A浓度较正常对照组明显升高(P0.05),Rapa组小鼠脾细胞培养液上清液中的IL-17A浓度较EAE组明显降低(P0.05)。4各组小鼠脊髓组织HE染色光镜下炎性病灶数比较:免疫后第20天,EAE组小鼠脊髓组织炎性病灶数较正常对照组明显升高(P0.05),Rapa组小鼠脊髓组织炎性病灶数较EAE组明显减少(P0.05)。5各组小鼠脾组织中HIF-1α及GLUT1 mRNA含量比较:免疫后第20天,EAE组小鼠脾组织中HIF-1α及GLUT1 mRNA与正常对照组相比表达明显增多(P0.05),Rapa组小鼠脾组织中HIF-1α及GLUT1 mRNA与EAE组相比表达明显降低(P0.05)。结论:1雷帕霉素通过抑制Th17细胞生成及相关促炎因子IL-17A分泌而起到对EAE的保护作用。2雷帕霉素对Th17细胞的调节作用和对EAE的保护作用是通过mTOR/HIF-1α通路起作用的。
[Abstract]:Aim: to study the effects of rapamycin on the percentage of Th17 cells and the expression of HIF-1 伪 -GLUT1 in spleen of (experimental autoimmune encephalomyelitis (experimental autoimmune) mice, and to explore the immunomodulatory effect of rapamycin on the immunomodulation and the differentiation of Th17 cells in the mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. To further elucidate the possible mechanism of rapamycin and provide a basic experimental basis for guiding clinical drug use. Methods: C57BL / 6 mice were randomly divided into Rapa group, EAE group and normal control group. The mice in Rapa group were given rapamycin 1mg/kg daily intraperitoneal injection since the first day of immunization, and normal control group and EAE group were given the same amount of normal saline daily intraperitoneal injection. The incidence, body weight and neurological function of mice were observed. Mice were killed on the 20th day after immunization. The infiltration of inflammatory cells in the spinal cord of mice was observed by HE staining, the expression of IL-17A in the supernatant of mouse splenocytes was detected by flow cytometry, and the expression of HIF-1 伪 and GLUT1 mRNA in spleen tissue was detected by Real-time PCR. Results the clinical manifestations of mice in different groups were as follows: compared with EAE group, the incidence of non-disease-free Rapa mice in normal control group was higher than that in EAE group. The percentage of Th17 cells in spleen tissue of mice was significantly decreased on the 20th day after immunization (P0.05): Th17 cell ratio in the EAE group was significantly higher than that in the control group on the 20th day after immunization (P 0.05) Th17 cells in the Rapa group were significantly higher than those in the control group (P0.05). The percentage of IL-17A in the supernatant of spleen cell culture medium in each group was significantly lower than that in the EAE group (P0.05). The concentration of IL-17A in the supernatant of spleen cell culture medium in EAE group was significantly higher than that in the control group on the 20th day after immunization. (P0.05) the concentration of IL-17A in spleen cell supernatant in Rapa group was significantly higher than that in the control group (P0.05). The concentration of IL-17A in supernatant of cell culture medium was significantly lower than that in EAE group (P0.05). 4 comparison of the number of inflammatory foci in spinal cord tissue under HE staining in each group: the number of inflammatory lesions in spinal cord tissue in EAE group was significantly higher than that in normal control group on the 20th day after immunization. The expression of HIF-1 伪 and GLUT1 mRNA in spleen tissue of mice in Rapa group was significantly lower than that in EAE group (P0.05): the expression of HIF-1 伪 and GLUT1 mRNA in spleen tissue of EAE group was significantly higher than that in normal control group on the 20th day after immunization. The expression of HIF-1 伪 and GLUT1 mRNA in spleen tissue of Rapa group was significantly lower than that in EAE group (P0.05). Conclusion the protective effects of rapamycin on EAE by inhibiting Th17 cell generation and the secretion of IL-17A. 2 the regulatory effect of rapamycin on Th17 cells and the protective effect of rapamycin on EAE may be mediated by the mTOR-HIF-1 伪 pathway.
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R744.5
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，本文编号：2093983
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