大鼠脑缺血再灌注后炎性因子、神经细胞凋亡、血脑屏障变化的动态研究

发布时间：2018-10-08 11:07

【摘要】：目的： 探讨大鼠脑缺血再灌注后炎性细胞因子、神经细胞凋亡、血脑屏障结构和功能的动态变化及意义，以期为脑梗死模型大鼠病理分期及临床脑卒中治疗提供实验依据。 方法： 1、将SD大鼠随机分成正常对照组和缺血再灌注0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、12h、24h、48h、4d、6d、10d、14d、18d组，采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，对造模后大鼠进行神经功能评分； 2、ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)变化； 3、免疫组化法测定脑组织炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6，基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达； 4、原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡； 5、伊文斯蓝（Evans blue，EB）-紫外分光光度分析法检测血脑屏障（BBB）功能变化。 结果： 1、与正常对照组比较，血清中TNF-α、IL-1β、IL-6浓度分别从MCAO后0.5h、1h、4h开始明显上调(p＜0.05)，4h、6h、12h达到第一个峰值(p＜0.05)；TNF-α和IL-1β在第10d达第二个峰值(p＜0.05)，IL-6在第4d即达第二个峰值(p＜0.05)。 2、与正常对照组比较，脑组织中TNF-α+细胞数在2h显著升高(p＜0.05)，24h达峰值(p＜0.05)，第4d迅速降低至正常水平；第6d缓慢升高，14d逐渐降低(4d-18d组, P＞0.05)；IL-1β+和IL-6+细胞数0.5h开始显著上调(p＜0.05)，分别于12h、24h达第一个峰值；均在6d达第二个峰值(p＜0.05)。 3、与正常对照组比较，病灶侧皮质区TUNEL阳性细胞表达在2h开始显著增加（P＜0.001），24h达到高峰（P＜0.001），48h稍减少但仍维持较高水平（P＜0.001），之后逐渐减少，，至18d降至正常表达水平（P=0.196）。 4、与正常对照组比较，病灶侧和健侧脑组织中MMP-9均在0h表达增加（P＜0.05），48h达到高峰（P＜0.001），第4d后降低；模型组不同时间点病灶侧与健侧脑组织MMP-9表达水平比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。 5、与正常对照组比较，脑组织病灶侧和健侧Evans blue含量分别在2h、4h开始升高（P＜0.001），均至24h达到高峰（P＜0.001）,之后逐渐减少；模型组病灶侧和健侧脑组织中EB含量各时间点比较均有显著性差异（P＜0.05）。 结论： 脑缺血再灌注后12h~48h表现出神经组织早期缺血坏死性损伤、凋亡、血脑屏障破坏高峰，6d~10d以胶质增生、损伤修复为主，14d后主要表现为炎症反应消退、胶质瘢痕形成、血脑屏障重建。
[Abstract]:Objective: to investigate the dynamic changes and significance of inflammatory cytokines, neuronal apoptosis and blood-brain barrier structure and function after cerebral ischemia-reperfusion in rats. So as to provide experimental basis for pathological stage and clinical stroke treatment of cerebral infarction model rats. Methods: 1. SD rats were randomly divided into two groups: normal control group and control group. The rats were randomly divided into two groups: normal control group and control group. The rats were randomly divided into two groups: normal control group and control group. The rats were randomly divided into two groups: normal control group and control group. The rats were randomly divided into two groups: the control group and the control group. The rats were randomly divided into two groups: the control group and the control group. The rats were randomly divided into two groups: the control group and the control group. The rats were randomly divided into two groups: normal control group and control group. The 2Serum levels of tumor necrosis factor 伪 (TNF- 伪), interleukin-1 尾 (IL-1 尾) and interleukin-6 (IL-6) in serum were determined by Elisa, and the expression of TNF- 伪, IL-1 尾 and MMP-9 in brain tissue was determined by immunohistochemistry. (4) neuronal apoptosis was detected by in situ end labeling method (TUNEL), and 5, (BBB) function of blood brain barrier was detected by Evans blue,EB-UV spectrophotometry. Results: 1.Compared with the normal control group, the serum TNF- 伪 IL-1 尾 IL-6 concentration increased significantly from 1 h to 4 h after MCAO (p < 0 05) and reached the first peak at 6 h and 12 h (p < 0 05). TNF- 伪 and IL-1 尾 reached the second peak on the 10th day (p < 0. 05) and IL-6 reached the second peak on the 4th day (p < 0. 05). 2Compared with the normal control group, the number of TNF- 伪 cells in brain tissue increased significantly at 2 h (p < 0 05) and reached the peak at 24 h (p < 0 05), then decreased rapidly to the normal level on the 4th day, and decreased gradually on the 6th day (4d-18d group, P > 0 05). The number of IL-1 尾 and IL-6 increased significantly at 0.5 h (p < 0 05), reaching the first peak at 12 h and the second peak at 6 d (p < 0 05). 3Compared with the normal control group, the expression of TUNEL positive cells began to increase significantly at 2 h (P < 0.001) and reached the peak at 24 h (P < 0.001), but maintained a higher level (P < 0.001) at 48h, then gradually decreased to the normal expression level (P0. 196) at 18 d. 4Compared with the normal control group, the expression of MMP-9 increased at 0 h (P < 0 05) and reached the peak at 48 h (P < 0.001), and decreased after 4 d. There were significant differences in the expression of MMP-9 between the lesion side and the normal side at different time points in the model group (P < 0. 01). 5Compared with the normal control group, the content of Evans blue in the focus side and the healthy side of brain tissue began to increase at 4 h after 2 hours (P < 0.001), reached the peak at 24 h (P < 0.001), and then decreased gradually. In the model group, there were significant differences in the content of EB between the focus side and the normal side at different time points (P < 0. 05). Conclusion: 12h~48h showed early ischemic and necrotic injury and apoptosis after cerebral ischemia-reperfusion. The peak of blood-brain barrier damage was glial proliferation for 10 days, and the inflammatory reaction disappeared after 14 days of injury repair. Glial scar formation, blood brain barrier reconstruction.
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.31

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本文编号：2256525