载脂蛋白E及其拟肽COG1410对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤和炎症反应的影响

发布时间：2018-11-02 20:37

【摘要】：目的蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)是一种致死致残率极高的出血性卒中类型。SAH后早期脑损伤(early brain injury,EBI)是指发病后72h内发生的整个脑组织的直接病理损害。载脂蛋白E(apolipoprotien E,apo E)是中枢神经系统主要的载脂蛋白,不仅参与脂质代谢,还通过调节神经炎症反应发挥神经保护作用。Apo E蛋白受体结合区拟肽COG1410具有和apo E全蛋白相同的受体结合能力,并且可自由透过血脑屏障,是一种有转化应用前景的神经保护剂。Apo E在SAH后的神经保护作用鲜有文献报道。本研究在SAH小鼠模型和体外培养的BV-2小胶质细胞中验证apo E和COG1410在SAH后EBI和神经炎症反应中的作用,并初步探讨相关机制。方法1.C57BL/6J野生(wild type,WT)和APOE敲除(APOE knock out,APOE-/-)小鼠分别用血管内穿刺法建立假手术和SAH模型,检测SAH后内源性apo E在72h内的表达变化。建模后24h用转棒试验评估神经功能,TUNEL法检测皮层神经细胞凋亡,免疫组织化学法和7.0T MRI检测白质损伤,免疫组织化学法检测小胶质细胞活化,ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α表达,western blot检测JNK、c-Jun、NF-κB磷酸化,比较WT和APOE-/-小鼠SAH后EBI和神经炎症反应的差异。2.C57BL/6J野生小鼠建立SAH模型,分别静脉注射COG1410和生理盐水对照,用体重变化、转棒试验和神经功能评分评估COG1410神经保护作用的最佳剂量和时间窗。建模后24h用TUNEL法检测皮层神经细胞凋亡,免疫组织化学法和7.0T MRI检测白质损伤,免疫组织化学法检测小胶质细胞活化,ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α表达,western blot检测JNK、c-Jun、NF-κB磷酸化,验证COG1410减轻EBI和神经炎症反应的作用。3.体外培养BV-2小胶质细胞株用血红蛋白(hemoglobin,Hb)诱导活化,COG1410作用24h后Griess法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)释放,流式细胞术检测细胞表型转化,western blot检测JNK磷酸化。验证COG1410对小胶质细胞活化和极化的影响。将Hb和Hb+COG1410处理BV-2的条件培养基作用于HT-22神经元细胞株,流式细胞术检测HT-22细胞凋亡。JNK抑制剂SP600125作用Hb激活的BV-2细胞,Griess法检测NO释放,流式细胞术检测细胞表型转化,探讨COG1410影响BV-2细胞活化和极化的可能机制。结果1.SAH后6h开始,内源性apo E表达增多。APOE-/-小鼠24h存活率和转棒时间均低于WT小鼠,APOE-/-小鼠皮层神经细胞凋亡和白质损伤较WT小鼠加重。APOE-/-小鼠SAH后24h小胶质细胞活化水平、IL-1β、IL-6、TNF-α表达,JNK、c-Jun、NF-κB磷酸化水平均高于WT小鼠。2.SAH后注射COG1410的最低有效剂量是2mg/kg,有效时间窗是SAH后2h以内,可显著改善小鼠神经功能。COG1410可减轻SAH后皮层神经细胞凋亡和白质损伤,降低小胶质细胞活化水平,抑制小胶质细胞M1型极化,并促进M2型极化,减少脑内IL-1β、IL-6、TNF-α表达,抑制JNK、c-Jun、NF-κB磷酸化。3.COG1410可抑制Hb激活的BV-2细胞释放NO,并可抑制BV-2细胞M1型极化,并促进M2型极化。与Hb单独处理的BV-2细胞相比,COG1410处理后的BV-2细胞条件培养基可减少HT-22神经元凋亡。COG1410可抑制BV-2细胞JNK磷酸化,而JNK抑制剂SP600125可抑制BV-2细胞NO释放和M1型极化,但对M2型极化无影响。结论内源性apo E和apo E拟肽COG1410可抑制SAH后皮层神经细胞凋亡、白质损伤和神经炎症反应,改善小鼠神经功能。COG1410可通过抑制JNK信号通路抑制小胶质细胞活化和M1型极化,并减轻对神经元的损伤。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.35

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本文编号：2306883