空肠弯曲菌联合百日咳毒素致Hartley豚鼠周围神经损伤的研究

发布时间：2018-11-21 09:27

【摘要】：目的：通过构建空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni, Cj）活菌口服灌胃，联合腹腔注射百日咳毒素（pertussis toxin，PT）致Hartley豚鼠周围神经损伤的模型。探讨空肠弯曲菌消化道感染后同时腹腔给予百日咳毒素对加重周围神经组织损伤的影响，进而为周围神经病——吉兰-巴雷综合征（Guillain-Barre syndrome, GBS）动物模型的建立提供实验基础。方法： 1空肠弯曲菌的培养、鉴定及菌悬液的制备：选取吉兰-巴雷综合征（Guillain-Barre syndrome, GBS）患者粪便中分离并培养出的空肠弯曲菌lulei株，经中国疾病预防控制中心鉴定为空肠弯曲菌菌株。用哥伦比亚血培养基于42℃，10%CO2、5%O2、85%N2条件培养空肠弯曲菌。并经革兰染色、马尿酸水解实验及过氧化氢酶实验进行鉴定。纯化菌种，制备3×108cfu/ml菌悬液。 2实验动物分组：将30只Hartley豚鼠随机分为实验组和对照组，实验组分为：A组：空肠弯曲菌lulei株+百日咳毒素组，B组：空肠弯曲菌lulei株+生理盐水组；对照组分为：C组：布氏肉汤+百日咳毒素组，D组：布氏肉汤+生理盐水组，E组：空白对照组。 3实验动物攻毒：口服灌喂Hartley豚鼠，灌喂前禁食12小时、禁水4小时。实验组A组、B组给予浓度为3×108cfu/ml的菌悬液，2ml/只，对照组C组、D组给予同等量的布氏肉汤进行灌胃。灌胃周期为每周连续3天且连续4周进行。于第1周和第2周的第1次和第3次灌胃后，A组和C组腹腔注射0.5ml含1ug百日咳毒素的生理盐水，B组、D组给予0.5ml生理盐水。 4实验动物临床症状、病理观察及病变统计：自灌喂当日起每日观察豚鼠的临床症状，定期称量豚鼠体重，观察豚鼠的皮毛情况。于末次攻毒后1周取材，分别取双侧坐骨神经进行锇酸染色观察及透射电镜观察，根据锇酸染色病变率进行χ2检验。结果： 1实验动物观察：根据临床症状评分标准进行评分，实验组A组、B组和对照组C组、D组、E组临床症状均为0级。实验组A组有1只豚鼠于第3周开始出现腹部皮毛较脏现象。实验组A组和B组整体体重增长速度较慢。实验组A组、B组豚鼠与第3周开始有掉毛的现象。 2周围神经病理表现： 2.1锇酸染色：实验组A组豚鼠坐骨神经部分纤维粗细不等，髓鞘节段性皱缩、断裂，呈“长城样”改变，部分神经单丝断裂；实验组B组豚鼠坐骨神经部分纤维呈“锯齿样”改变，节段性皱缩，神经纤维粗细不均匀；对照组豚鼠坐骨神经纤维锇酸染色未见异常。 2.2透射电镜观察：实验组A组豚鼠坐骨神经髓鞘粗细不等，板层结构消失，并出现断裂缺如，部分轴索被压迫消失；实验组B组豚鼠坐骨经髓鞘部分板层结构消失，融合紊乱，微丝微管排列紧密，线粒体嵴模糊。对照组神经髓鞘粗细均匀，板层结构完整，，微丝微管排列正常。 3神经纤维病变率及统计分析： 3.1神经纤维病变率：实验组中周围神经存在损伤的Hartley豚鼠占100%，实验组和对照组Hartley豚鼠周围神经的平均病变率不同，实验组A组病变率为47.3%，实验组B组病变率为18.8%，对照组C组病变率为3.8%，对照组D组病变率为2.5%，空白对照组E组病变率为2.8%。 3.2病变率统计分析：对资料进行χ2检验，采用SPSS13.0统计软件包进行统计分析，神经纤维平均病变率比较采用χ2检验，进行双侧性显著检测。检验水准取α=0.05。得出P＜0.05，认为各组的发病率不全相等。进一步进行组间比较，采用χ2分割法，检验水准取α=0.05，需进行A组、B组、C组、D组分别与E组比较，以及A组与B组比较，校正后检验水准α′=0.01。A组与E组比较，得出P＜0.01，认为A组和E组病变率不同，有统计学意义，且A组病变率高于E组病变率；B组和E组比较，得出P＜0.01，认为B组和E组病变率不同，有统计学意义，且B组病变率高于E组病变率；C组和E组比较，得出P＞0.01，认为C组和E组病变率相同，无统计学意义；D组和E组比较，得出P＞0.01，认为D组和E组病变率相同，无统计学意义。A组和B组比较，得出P＜0.01，认为A组和B组病变率不同，有统计学意义，且A组病变率高于B组病变率。结论： 1消化道感染空肠弯曲菌能够导致3周龄Hartley豚鼠周围神经损伤，周围神经存在损伤的豚鼠占100%，且周围神经纤维平均病损率为18.8%。 2消化道感染空肠弯曲菌后进行腹腔注射百日咳毒素导致3周龄Hartley豚鼠周围神经损伤，周围神经存在损伤的豚鼠占100%，周围神经纤维平均病损率增加到47.3%。推论：消化道感染空肠弯曲菌后引起Hartley豚鼠周围神经损伤，百日咳毒素通过改变豚鼠自身状况——免疫状况、血液-神经屏障附近血管的通透性等加重周围神经损伤。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R745

【引证文献】