Delta阿片受体对全脑缺血大鼠突触可塑性相关蛋白的调控的初步研究

发布时间：2018-11-21 09:31

【摘要】：阿片受体(opioid receptors)属于G蛋白偶联受体,参与镇痛、呼吸抑制、免疫反应、心肌保护、抑制肠胃蠕动等多种生理活动。其在体内有多种亚型,其中在中枢神经系统内,至少存在μ、κ、δ3种亚型。本实验用到的DADLE([D-Ala2, D-Leu5]enkephalin)是δ-阿片受体(delta-opioid receptor, DOR)激动剂。近年来的研究结果表明,DADLE除了具有镇痛作用外,还能有效地延长移植器官的体外保存时间、缩小心肌梗死灶面积、减轻体外培养的神经细胞受到的损伤及脑片缺糖缺氧造成的损伤。大量关于脑缺血的研究是缺血预处理的研究,然而在临床医学上缺血后处理更加有意义,但对于缺血后处理的研究比较少。本实验室前期研究结果显示在大鼠全脑缺血后激活DOR能明显改善再灌注5～9天后的空间记忆功能。因此本论文主要考察了两组与学习记忆相关的蛋白的表达情况,以此来探究脑缺血后激活DOR对认知功能改善的分子机制。此外本论文还观察了脑缺血后激活DOR对神经细胞生存状态的影响。第一章构建全脑缺血再灌注大鼠模型本实验利用四血管阻断法来复制全脑缺血模型：即阻断双侧椎动脉和双侧颈总动脉。由于DADLE不能通过血脑屏障,因此为了在造模成功后进行侧脑室注射药物,需要在复制缺血模型之前对大鼠进行侧脑室埋管。第二章DOR对大鼠全脑缺血再灌注后神经元和星形胶质细胞的影响大鼠全脑缺血再灌注的过程中会引起大脑(特别是缺血易损区-海马)的神经元凋亡以及星形胶质细胞形态的改变。本实验室前期的实验结果显示脑缺血后激活DOR能明显改善再灌注3天后的神经细胞的生存状态,本论文主要是观察了再灌注7天后神经细胞的生存状态。结果显示缺血后激活DOR能减少再灌注7天后海马CA1区神经元的凋亡,并且促进星形胶质细胞的活化,减少星形胶质细胞的受损。第三章DOR对大鼠全脑缺血再灌注后突触蛋白I及其磷酸化形式的影晌突触蛋白I是位于突触前膜的蛋白,它通过磷酸化与去磷酸化来调节神经递质的释放,影响神经元的信号传递,从而影响神经元与星形胶质细胞的生存状态,进而影响认知功能。本章节主要是采用Western Blotting的方法检测DOR对大鼠脑缺血再灌注后突触蛋白I及其磷酸化形式的影响。结果显示：一、大鼠缺血再灌注3天后突触蛋白I在模型组中的表达量上调,在侧脑室注射DADLE组中表达量也上调,但是上调量比模型组大。大鼠缺血再灌注7天后突触蛋白I在模型组中表达量依然比对照组高,而在侧脑室注射DADLE组中突触蛋白I的表达量已经恢复到对照组水平。此外,侧脑室同时注射DADLE和Naltrindole组的结果与模型组相似。研究表明突触蛋白I对于修复脑缺血再灌注所引起的损伤是必要的,其表达量的降低会加重损伤,所以结果提示在脑缺血后激活DOR加快了组织的修复过程。二、磷酸化的突触蛋白I在大鼠缺血再灌注3天后,在模型组中表达量上调,而在侧脑室注射DADLE组中的表达量明显下调。在缺血再灌注7天后,磷酸化的突触蛋白I在模型组中的表达量下调,而在侧脑室注射DADLE组中的表达量上调。侧脑室同时注射DADLE和Naltrindole组的结果与模型组相似。磷酸化的突触蛋白I可以间接反映神经递质的传递情况。在脑缺血再灌注3天时,激活DOR明显下调磷酸化的突触蛋白I,从而阻止释放过量的神经递质,进而减少过量的兴奋性递质造成的兴奋性毒性。而在再灌注7天时,可能由于神经元要建立新的突触联系,需要重新恢复神经递质的释放。第四章DOR对大鼠全脑缺血再灌注后MARCKS及其磷酸化形式的影响豆蔻酰化的富含丙氨酸的激酶C底物(myristoylated alanine-rich C kinase substrate,MARCKS)依靠磷酸化和去磷酸化来调节树突棘形态和数量的稳定性,从而影响神经元的突触可塑性,最终影响认知功能。MARCKS及其磷酸化形式的表达量上调和下调都不利于维持树突棘的稳定,其表达量在生理水平是最佳状态。本章节主要是采用Western Blotting的方法检测DOR对大鼠脑缺血再灌注后MARCKS及其磷酸化形式的影响。结果显示在大鼠缺血再灌注3天后模型组MARCKS表达量上调,侧脑室注射DADLE组表达量下调。大鼠缺血再灌注7天MARCKS在模型组中表达量明显上调,而侧脑室注射DADLE组中MARCKS的表达量已经恢复到对照组水平。磷酸化的MARCKS在缺血再灌注3天时,在模型组中表达量下调,侧脑室注射DADLE组中表达量明显下调。在缺血再灌注7天时,在模型组中表达量上调,侧脑室注射DADLE组中表达量恢复至对照组水平。侧脑室同时注射DADLE和Naltrindole组的结果与模型组相似。结果提示MARCKS及其磷酸化形式在缺血再灌注3天时明显下调,虽然对于维持树突棘的稳定是不利的,但是这也许是在脑缺血再灌注的病理情况下的一种保护措施,可能是阻止脑缺血引起的凋亡信号放大从而保护神经元。而在缺血再灌注7天时侧脑室注射DADLE组恢复至生理水平,从而有利于建立新的突触联系,减少神经元损伤。
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【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R742

【参考文献】