【摘要】：目的:探讨酒精中毒对氯化钻诱导神经母细胞SK-N-SH细胞缺氧损伤的影响。方法:将SK-N-SH细胞分成4组,依次为空白组、氯化钴组、低浓度酒精组、高浓度酒精组。空白组未作任何处理;氯化钻组用含250μmol/L氯化钴的培养液处理6h;酒精组分别用含酒精(300mg/L、900mg/L)的培养液预处理lh,加入含250μmol/L氯化钻的培养液处理6h;4组细胞均选自对数生长期,放入培养箱内培养(37℃、5%C02);倒置显微镜下观察4组SK-N-SH细胞形态学;MTT检测4组细胞活力;Hoechst染色法测定4组细胞凋亡数目;Western blot法测定4组细胞Bax、Bcl-2、HIF-lα等蛋白的表达。结果:(1)镜下观察SK-N-SH细胞形态,氯化钴组和酒精组SK-N-SH细胞神经突出数目减少,掺杂死亡细胞;酒精组SK-N-SH细胞神经突出减少显著,死亡细胞数目增多;高浓度酒精组SK-N-SH细胞神经突出减少明显,死亡细胞数目增多。(2)MTT检测结果显示:与空白对照组比较,氯化钻组SK-N-SH细胞存活率明显降低(P0.001);与氯化钻组比较,低、高浓度酒精组SK-N-SH细胞存活率均明显降低(P0.01或P0.001);与低浓度酒精组比较,高浓度酒精组细胞存活率明显降低(P0.001)。(3)Hoechst法,倒置显微镜下观察氯化钻组SK-N-SH细胞核固缩,呈现为蓝色荧光,凋亡细胞数目增加;酒精组SK-N-SH细胞核固缩,蓝色荧光数目增加,凋亡细胞数目明显增加;高浓度酒精组细胞核固缩,蓝色荧光数目增加,凋亡细胞数目明显增加。(4)Westernblot结果显示:与空白组比较,氯化钴组和酒精组Bax、HIF-1α蛋白表达明显上调(P0.001),氯化钴组Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.001),低、高浓度酒精组Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.001或P0.01);与氯化钴组比较,酒精组Bax、HIF-1α表达上调(P0.001),Bcl-2蛋白表达下调(P0.001);与低浓度酒精组比较,高浓度酒精组Bax、HIF-1α表达上调(P0.001),8c1-2表达下调(P0.001)。结论:1.酒精中毒可以降低缺氧所致SK-N-SH细胞的生存率,加重缺氧细胞的损伤。2.酒精中毒使氯化钻致SK-N-SH细胞凋亡增加,其作用机制与通过上调HIF-1α、Bax表达、下调Bcl-2表达有关。
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【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R595.6;R743.3
【参考文献】
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2367070
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