【摘要】：目的探究脂肪基质细胞源性星形胶质细胞是否具有真正成熟星形胶质细胞的神经营养和清除细胞外谷氨酸的功能。方法1从成人腹部皮下脂肪组织中提取ADSC并进行传代培养;待ADSC生长至第3代第5d时应用DE-1诱导剂诱导分化,得诱导48h、7d、14d和21d组细胞,第3代第5d细胞为未诱导组细胞。倒置相差显微镜下观察各组细胞的形态学特征。2ADSC源性星形胶质细胞的鉴定:使用免疫细胞化学法、免疫荧光染色法和Western blotting法检测各组细胞的胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达。3 ADSC源性星形胶质细胞神经营养功能检测:使用免疫细胞化学法、免疫荧光染色法和Western blotting检测胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)的表达。4 ADSC源性星形胶质细胞清除谷氨酸功能检测:使用免疫细胞化学法、免疫荧光染色法和Western blotting检测谷氨酸转运体-1(Glutamate transporter-1,GLT-1)和谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)的表达;MTT法分别检测谷氨酸对细胞存活率的影响,从而确定“最适谷氨酸干预浓度”;“最适谷氨酸干预浓度”的谷氨酸干预各组细胞,谷氨酸浓度测定法检测各组细胞对细胞外谷氨酸浓度的影响。6统计学分析:使用Excel 2003录入实验数据并用SPSS17.0软件包进行统计分析,以P0.05为差异有统计学意义。结果1 ADSC原代培养24h时可见较多的长梭形、类圆形等形态的贴壁细胞,培养至第3代第5d时细胞呈长梭形、漩涡状排列生长;诱导48h时细胞胞质背向细胞核伸出少量较短的突起,诱导7d时其突起较诱导24h时增多、增长且部分突起交织成网,诱导14d时细胞可见更多网状交织的突起,诱导至21d时细胞突起较前变少、变短,偶可见突起断裂现象。2 ADSC源性星形胶质细胞鉴定结果:未诱导组未见GFAP阳性表达细胞,在各诱导组均可见GFAP阳性表达细胞,且其阳性表达部位广泛分布于细胞胞质和突起;GFAP的阳性表达率和表达水平均于诱导14d时达到高峰,且各组之间均存在统计学差异(P均0.05)。3 ADSC源性星形胶质细胞神经营养功能检测结果:未诱导组未见GDNF阳性表达细胞,在各诱导组均可见GDNF阳性表达细胞,且其阳性表达部位广泛分布于细胞胞质和突起;GDNF的阳性表达率和表达水平均于诱导7d时达到高峰,且各组之间均存在统计学差异(P均0.05)。4 ADSC源性星形胶质细胞谷氨酸清除功能检测结果:未诱导组未见GLT-1和GS阳性表达细胞及GFAP/GLT-1和GFAP/GS的共表达细胞,且其阳性表达部位广泛分布于细胞胞质和突起;以上细胞的阳性表达率和表达水平均于诱导14d时达到高峰,且各组之间均存在统计学差异(P均0.05)。130μm/l对各组细胞的存活率均无影响;在诱导48h、7d和14d组,随谷氨酸干预时间的延长,细胞外谷氨酸的浓度均逐渐降低(P均0.05);在未诱导和诱导21d组,随谷氨酸干预时间的延长,细胞外谷氨酸的浓度均无统计学差异(P均0.05);此外,诱导14d组细胞外谷氨酸浓度的下降趋势最明显。结论1 ADSC向星形胶质细胞诱导分化第7-14天时,细胞具有典型的成熟星形胶质细胞形态学特征。2 ADSC源性星形胶质细胞表达神经营养相关蛋白GDNF,且GDNF的表达于诱导分化反应第7d时达到高峰。3 ADSC源性星形胶质细胞表达谷氨酸清除相关蛋白GLT-1和GS,并且具有清除谷氨酸的功能,GLT-1和GS的表达和谷氨酸清除功能均于诱导分化反应第14d时达到高峰。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R741
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 魏赫;李亨;雷宇;于如同;虞正权;高殿帅;;GDNF剪接体α-pro-GDNF在大鼠C6胶质瘤细胞中的表达及其意义[J];神经解剖学杂志;2016年04期
2 崔乐乐;王云松;单明华;周云涛;田卫;;喷他佐辛对高糖环境下体外培养视网膜Müller细胞的保护作用[J];眼科;2016年03期
3 ;中国神经修复细胞治疗临床应用指南(2015年版)[J];中华细胞与干细胞杂志(电子版);2016年01期
4 古今;何新荣;韩亚亮;;血竭含药血清对雪旺氏细胞NGF,BDNF,CNTF,LNGFR,TrkA,GDNF,GAP-43和NF-H表达的影响[J];中国中药杂志;2015年07期
5 姚梦枝;肖志杰;许念桂;文铁;;脂肪间充质干细胞治疗神经系统变性疾病的研究进展[J];中风与神经疾病杂志;2014年09期
6 陈立;杜娟;陈丽;吕晓红;;GDNF及dbcAMP对神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元作用的实验研究[J];中风与神经疾病杂志;2014年07期
7 江山;徐成峰;李娅娜;谢红萍;袁华;王会会;李玲;;次声刺激诱导原代培养大鼠星形胶质细胞释放谷氨酸的研究[J];中国康复医学杂志;2014年06期
8 陆艳卉;元小冬;欧亚;蔡亚楠;孙巧玉;;成人脂肪基质细胞体外扩增生长和超微结构[J];中国组织工程研究;2013年10期
9 欧亚;元小冬;蔡亚楠;陆艳卉;;ADSC源性神经干细胞向神经元和星形胶质细胞不同方向分化时的超微结构变化研究[J];中国病理生理杂志;2011年07期
10 ;Ultrastructure of neuronal-like cells differentiated from adult adipose-derived stromal cells[J];Neural Regeneration Research;2010年19期
相关博士学位论文 前1条
1 方琦;脑内组胺及H1受体对星形胶质细胞谷氨酸代谢通路的调控作用[D];浙江大学;2013年
，
本文编号：
2381123
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/2381123.html
