幼鼠反复癫痫发作对海马长期影响及塞来昔布保护作用的研究

发布时间：2019-01-27 23:26

【摘要】：目的： 制作氯化锂-匹罗卡品诱导的幼鼠反复癫痫发作模型,观察幼鼠反复癫痫发作致苔藓纤维发芽(MFS)的动态变化及其与慢性期反复自发性发作(SRS)的关系。 方法： 1.模型制作将190只幼年期Wistar大鼠随机分为4组：对照组(n=48)、EP1组(n=80)、空白组(n=12)和EP2组(n=50),应用氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠模型,诱导幼鼠在生后21、25、29天反复癫痫发作。采用Timm染色法观察EP1组幼鼠末次癫痫发作后1、3、7、14、20、30、45、60d海马MFS的动态变化；观察EP2组SRS情况,比较EP2组中出现SRS(EP2-SRS组)和未出现SRS(EP2-非SRS组)的大鼠MFS的差异；采用Nissl染色观察海马神经元坏死及凋亡情况,对CA3、CA1区神经元进行计数,观察SRS对海马神经元的影响。 2.Timm染色在暗室中将切片放入新鲜配制的Timm染色液内孵育45～60min,倾去孵育液,流水冲洗10～15min后,常规脱水、透明、封片。分别对内分子层和CA3区Timm染色颗粒进行评分。 3.Niss1染色石蜡切片常规脱蜡至水,在60℃水浴箱中以1%硫瑾孵育30min,梯度乙醇分化至背景无色,常规脱水、透明、封片。对各组CA3、CA1区神经元进行计数,观察海马神经元的变化。 结果： 1.氯化锂-匹罗卡品诱导幼鼠反复癫痫发作模型造模较为成功,可部分模拟临床癫痫患儿反复发作情况,可用于实验研究。 2. Timm染色与对照组相比,EP1组在反复癫痫发作后14天MFS明显增加,并持续至60d后(P0.D5),EP2-SRS组与EP2-非SRS组相比无明显差异(P0.D5)。 3. Nissl染色EP2-SRS组与空白组相比,CA3、CA1区神经元损伤明显(P0.05)。 结论： 氯化锂-匹罗卡品诱导的幼年反复癫痫发作大鼠海马苔藓纤维发芽(MFS)明显增加；在氯化锂-匹罗卡品模型中,MFS可能不是导致慢性期自发性发作(SRS)的因素。 目的： 探讨环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对幼年反复癫痫发作的大鼠海马神经元的长期保护作用及其可能的机制。 方法 1.模型制作将30只幼年Wistar大鼠随机分为对照组(Control组)(n=6)、癫痫组(EP组)(n=12)和塞莱昔布干预组(Celecoxib组)(n=12)3组。应用氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠模型,诱导幼鼠在生后21、25、29天反复癫痫发作。Celecoxib组在末次诱导癫痫发作后通过胃管灌入20mg/kg-d的塞莱昔布,直至造模后45天。 2.Morris水迷宫测试所有大鼠于末次诱导癫痫发作后40-45天进行Morris水迷宫测试评价其视觉-空间学习和记忆能力。 3.Timm染色在暗室中将切片放入新鲜配制的Timm染色液内孵育45-60min,倾去孵育液,流水冲洗10-15min后,常规脱水、透明、封片。分别对内分子层和CA3区Timm染色颗粒进行评分。 4.Nissl染色石蜡切片常规脱蜡至水,在60℃水浴箱中以1%硫瑾孵育30min,梯度乙醇分化至背景无色,常规脱水、透明、封片。对各组CA3、CA1区神经元进行计数,观察海马神经元的变化。 5.免疫组化实验切片依次进行脱蜡、抗原修复、封闭、加一抗、二抗、辣根酶标记、显色、复染、脱水、封片。 结果： 1. Morris水迷宫癫痫组、塞来昔布干预组大鼠到达平台的潜伏期在各时间均长于对照组大鼠(P0.05)；塞来昔布干预组大鼠到达平台的潜伏期在各时间点均较癫痫组更长(P0.05)。 2. Timm染色在癫痫组、塞来昔布干预组与对照组相比,在CA3区和内分子层均可见明显Timm染色颗粒(P0.05)；而塞来昔布干预组与癫痫组相比,CA3区、内分子层MFS评分无统计学差异(P0.05)。 3. Nissl染色癫痫组神经元数目较对照组明显减少,差异有统计学意义(P0.05)；癫痫组CA3区、CA1区神经元细胞数较塞来昔布干预组少(P0.05)(P0.05)。 4.免疫组化癫痫组与对照组大鼠相比,NF-κBp65阳性细胞数目明显增加(P0.05)；塞来昔布干预组大鼠与癫痫组相比,CA3区NF-κBp65阳性神经元数目明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。 结论： cox-2抑制剂塞来昔布对Licl-Pilo诱导的幼年反复癫痫发作的大鼠的海马神经元具有保护作用,其机制可能与塞来昔布抑制海马神经元的炎症反应有关。塞来昔布可能对大鼠空间学习记忆能力产生一定的影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R742.1

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本文编号：2416805