Gab2-ARK5信号通路促进胶质瘤侵袭的探讨

发布时间：2019-02-21 20:49

【摘要】：目的:胶质瘤是中枢神经系统最为常见的肿瘤之一,它的预后与肿瘤的侵袭有着密切的联系。本研究通过探讨ARK5和Gab2是否通过Gab2-Akt-ARK5信号通路促进胶质瘤的侵袭,为有效控制胶质瘤的侵袭提供全新的治疗靶点。材料和方法:收集潍坊医学院附属医院病理科2005年至2013年明确诊断为胶质瘤的90例病例作为研究对象,其中低级别胶质瘤(WHOⅠ、Ⅱ级)42例,高级别胶质瘤(WTOⅢ、Ⅳ级)48例。所有患者临床及病理资料均齐全并且术前均未接受放疗、化疗。1.应用常规HE染色,光镜下观察结果,经病理明确诊断。2.采用免疫组织化学染色SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5和Gab2蛋白表达,分析ARK5和Gab2蛋白在低级别胶质瘤组与高级别胶质瘤组的表达差异,同时分析ARK5和Gab2蛋白表达的相关性。3.选取胶质瘤LN-229细胞进行细胞培养,传代2次后采用细胞转染技术将ARK5目标片段5'-GAAGTTATGCTTTATTCAC-3'的小RNA干扰质粒、Gab2目标片段5'-GTGAGAACGATGAGAAATA-3'的小RNA干扰质粒和SCR序列的小RNA干扰质粒转入LN-229细胞内。转染后细胞株分别命名为siARK5/LN-229细胞(实验A组)、siGab2/LN-229细胞(实验G组)、siARK5siGab2/LN-229细胞(实验AG组)和SCR/LN-229细胞(对照组),并通过蛋白质印迹法(Western blot)检测上述各组中ARK5和Gab2蛋白的降表达情况。4.应用Transwell细胞体外侵袭实验检测实验组和对照组LN-229细胞侵袭能力。5.采用明胶酶谱实验检测在类胰岛素样生长因子-1(IGF-1)刺激下的实验组和对照组中金属基质蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性。6.在IGF-1刺激下,再次采用Western blot检测实验G组和对照组ARK5和Akt的磷酸化情况。结果:1.免疫组织化学结果显示:高级别胶质瘤组ARK5蛋白表达明显高于低级别胶质瘤组,差异具有统计学意义(P=0.002,P0.05);高级别胶质瘤组Gab2蛋白表达明显高于低级别胶质瘤组,差异具有统计学意义(P=0.000,P0.05);90例胶质瘤组织中ARK5和Gab2蛋白表达呈正相关(P=0.000,P0.05)。2.Transwell细胞体外侵袭实验结果显示:与对照组相比,实验A组,G组和AG组细胞穿透基质膜的细胞数目均明显减少,差异有统计学意义(P0.05,P0.05,P0.05),其中实验AG组细胞穿透基质膜的细胞数目减少更为明显。3.明胶酶谱结果显示:与对照组相比,实验A组,G组和AG组MMP-2和MMP-9均表达下降。4.Western blot结果显示:4.1与对照组相比,实验A组仅ARK5蛋白表达降低,实验G组仅Gab2蛋白表达降低,实验AG组ARK5和Gab2蛋白均表达降低;4.2与对照组相比,实验AG组Akt和ARK5的磷酸化水平减弱而Akt和ARK5蛋白总量不变。数据采用SPSS16.0软件进行相关统计学分析。免疫组织化学采用χ2检验,对ARK5和Gab2之间进行Spearman相关分析。所有定量资料数据结果用平均值x±s表示。各组两两比较用t检验。P0.05表示差异有统计学意义。结论:1.胶质瘤组织中ARK5和Gab2蛋白表达与胶质瘤分级有关且ARK5和Gab2蛋白在胶质瘤中的表达呈正相关,提示ARK5和Gab2对胶质瘤恶性程度的评估具有一定的指导意义。2.小RNA干扰降低ARK5和Gab2表达后,能使胶质瘤LN-229细胞侵袭能力降低,也能使胶质瘤LN-229细胞中MMP2和MMP9的表达降低,提示ARK5和Gab2可促进胶质瘤的侵袭,可作为胶质瘤联合靶向治疗的生物学指标。3.小RNA干扰降低Gab2表达后,可使胶质瘤LN-229细胞Akt和ARK5的磷酸化水平受到抑制,提示Gab2在信号通路中位于Akt和ARK5的上游且ARK5和Gab2可通过Gab2-Akt-ARK5信号通路促进胶质瘤侵袭。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：潍坊医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.41

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本文编号：2427881