神经干细胞移植治疗大鼠脑梗死的实验研究

发布时间：2019-04-21 17:34

【摘要】：背景目前,脑梗死(cerebral infarction)是导致人类死亡和残疾的危害人类健康的主要疾病之一。截至当代,脑梗死造成的细胞损伤和死亡仍无确实有效的治疗方法。一旦脑梗死的缺血损伤达到最大限度,就会导致不可逆的神经功能损伤,恢复到发病前的状态是非常困难的。即使是得到及时治疗,许多患者仍存在永久性神经功能缺失,遗留不同程度的残疾。近年来,国内外的研究人员研究发现多种治疗方案,从溶栓治疗到介入微创治疗,从应用多种药物或中医中药等治疗,都力求恢复脑梗死部位的血液供应,保护缺血半暗带的脑组织。这些方法虽改善了患者的临床症状,但因治疗“时间窗”等诸多因素的制约,都没能从根本上阻断脑损伤的发生或者有效地促使受损脑组织再生。因此,受损脑组织的修复与神经功能的恢复始终是人们追求的一种理想治疗结果。实验研究发现,细胞移植通过其潜在的自我修复功能使受损组织得以新生。有鉴于此,研究人员把关注的焦点放在如何运用干细胞移植方法治疗脑梗死。干细胞移植治疗脑梗死,就是通过促进局部多种神经营养因子的产生;这些因子能通过清除自由基,减低兴奋性氨基酸的毒性作用等各种途径发挥神经保护作用,从而达到减少细胞凋亡的发生。通过促进血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维因子(b FGF)等因子的产生而刺激血管新生,增强局部脑血流量而对抗缺血的损伤。因此,本实验通过选取具有完整个体分化潜能的胚胎干细胞移植到脑梗死大鼠模型内,探讨其在体内增殖、分化情况及疗效。目的探讨神经干细胞移植治疗脑梗死大鼠神经功能损伤的可行性及疗效。方法用线栓法将成年雄性大鼠制成大脑中动脉脑梗死模型,模型成功后随机分为实验组25只和对照组25只,取孕15d胎鼠的大脑皮层和海马区脑组织提取培养的神经细胞,经nestin表达阳性鉴定为神经干细胞,实验组经尾静脉注射1μL神经干细胞悬液,对照组经尾静脉注射1μL生理盐水,在移植后1d、3d、7d、14d、28d依据Garcia的18分评分法对各组大鼠的神经功能进行评分,行脑灌注固定取材,通过免疫组织化学染色方法观察移植后神经干细胞的分化、迁移和整合情况。结果1.体外分离培养的神经细胞在无血清培养液中形成大量的神经球。经3—5代传代的细胞生长稳定。经nestin染色鉴定大部分为阳性细胞,神经细胞球经胎牛血清培养液贴壁培养后可分化为表达神经元特异烯醇化酶(NSE),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(GALC)表达阳性的细胞。2.移植后大鼠神经功能评分:缺血移植组大鼠的神经功能评分与对照组比较显著升高(P0.05);缺血移植组大鼠的神经功能评分在28d较14d时显著升高(P0.05)。结果显示缺血移植组与对照组比较神经功能评分显著升高,结果有差异性,结果差异显著(P0.05)。3.免疫荧光染色,行免疫组织化学染色能够检测到存活的Brdu阳性细胞,移植后28d可见移植细胞向周围迁移、分化,参与血管形成,并可见梗死区边缘血管明显增生。实验组大鼠GFAP阳性细胞计数较对照组明显增多,结果差异显著(P0.05)。结论1.从孕15天胎鼠大脑皮质和海马组织分离出的神经干细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,在5%的胎牛血清培养液下神经干细胞具有向神经元和神经胶质细胞分化的潜能。2.神经干细胞移植后,在28d可见移植细胞向周围迁移、分化,参与血管形成,并可见梗死区边缘血管明显增生。3.在体外培养的神经干细胞能在脑梗死大鼠脑内存活、迁移和分化。4.在体外培养的神经干细胞移植到脑梗死后大鼠体内,并且对脑梗死大鼠的神经功能修复起到了积极的作用。
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3

【共引文献】