青蒿琥酯对实验性自身免疫性脑脊髓炎防治作用的研究

发布时间：2019-05-14 23:13

【摘要】：目的：观察青蒿琥酯（Ast）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的防治作用并探讨其作用机制。方法：将50只Wistar雌性大鼠随机分成5组：正常对照组、EAE对照组及Ast大剂量、中剂量、小剂量组。用新鲜豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）与含卡介苗(BCG)的完全福氏佐剂（CFA）建立EAE模型。自造模当日起连续10天，Ast大、中、小剂量组分别给予Ast20mg/(kg.d)、10mg/(kg.d)、5mg/(kg.d)进行干预。于EAE大鼠发病高峰期（大鼠神经功能障碍评分连续三天无增加或大鼠处于濒死状态、对外界刺激无反应或死亡）终止实验，已经注入免疫抗原进行EAE造模处理而未发病大鼠及正常对照组大鼠分别均于观察1个月后处死。对大鼠进行神经功能障碍评分，将中枢神经系统（CNS）切片于苏木素-伊红（HE）染色后行病理观察并根据Okuda等的标准进行评分，予免疫组织化学检测脑组织中前列腺素E2（PGE2）及酪氨酸蛋白激酶A4（EphA4）、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP-1）的表达情况，用ImagePro Plus软件对PGE2、EphA4、PARP-1的表达进行平均光密度值(OD值)测定，予放射免疫法和双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）分别测定脑组织中TNF-及IL-17含量，并采用放射免疫法测定血清中IL-2、IL-4含量，使用spss17.0软件对所获得的数据进行统计学分析。结果：（1）临床情况：①正常对照组大鼠未发病。与EAE对照组相比，Ast各剂量组EAE发病率均下降（P0.05），但Ast大、中剂量组间发病率差异无统计学意义（P0.05）。②与EAE对照组相比，Ast各剂量组EAE发病潜伏期均延长(P0.05)，以大剂量组潜伏期延长最明显。③与EAE对照组相比，，Ast各剂量组EAE疾病进展期均缩短，且随Ast剂量增加，进展期越短，各组间差异均有统计学意义(P0.05)。④与EAE对照组相比，Ast各剂量组神经功能障碍评分均降低，以Ast大剂量组最为明显，且各组间差异具有统计学意义(P0.05)。（2）HE染色病理学观察情况：正常对照组大鼠脑组织内未见炎性细胞浸润。EAE对照组及Ast各剂量组脑组织小血管周围均可见不同程度炎性细胞浸润，典型者大量淋巴细胞及单核细胞聚集于血管周围呈袖套样改变。按Okuda等的标准进行评分，与EAE对照组相比，Ast各剂量组评分均有下降(P0.05)，且随Ast剂量增加EAE大鼠脑组织病理学评分依次降低，各剂量组间差异具有统计学意义(P0.05)。（3）EAE对照组及Ast各剂量组免疫组织化学结果：①与正常对照组相比，EAE对照组及Ast各剂量组PGE2含量均明显升高（P0.05）。与EAE对照组相比，Ast各剂量组PGE2含量均减少（P0.05），且随Ast剂量的增加PGE2含量依次下降，各剂量组间差异具有统计学意义（P0.05）。②正常对照组未见EphA4的表达，EAE对照组与Ast各剂量组均可见EphA4表达，尤以EAE对照组明显。与EAE对照组相比，Ast各剂量组EphA4表达均减少，且随Ast剂量增加EphA4表达呈下降趋势，各剂量组间差异有统计学意义（P0.05）。③与正常对照组相比，EAE对照组PARP-1表达减少，而Ast各剂量组PARP-1表达上调（P0.05）。与EAE对照组相比，Ast各剂量组PARP-1表达均增多（P0.05），以大剂量组增多最明显，且Ast各剂量组间差异具有统计学意义（P0.05）。（4）EAE对照组及Ast各剂量组脑组织内TNF-及IL-17含量变化：①EAE对照组及Ast各剂量组脑组织内TNF-含量较正常对照组均增加，但Ast大剂量组与正常对照组间差异无统计学意义（P0.05）。与EAE对照组相比，Ast各剂量组TNF-含量均减少，差异有统计学意义（P0.05），且随Ast剂量增加，大鼠脑组织TNF-含量减少越明显（P0.05）。②与正常对照组相比，EAE对照组和Ast各剂量组IL-17含量均明显升高（P0.05）。与EAE对照组相比，Ast各剂量组IL-17含量均下降，且随Ast剂量的增加IL-17含量下降越明显，各组间差异均具有统计学意义（P0.05）。（5）EAE对照组及Ast各剂量组血清中IL-2、IL-4含量变化：①与正常对照组相比，EAE对照组及Ast各剂量组血清中IL-2含量均升高（P0.05）。与EAE对照组比较，Ast各剂量组IL-2含量均减低（P0.05）。随Ast剂量的增加Ast各剂量组IL-2含量依次下降，但大、中剂量组间差异无统计学意义（P0.05）。②Ast各剂量组IL-4含量较正常对照组升高，而EAE对照组IL-4含量较正常对照组下降，差异均具有统计学意义（P0.05）。与EAE对照组比较，Ast各剂量组IL-4含量均升高（P0.05），且随Ast剂量的增加Ast各剂量组IL-4含量依次上升，各组间差异具有统计学意义（P0.05）。（6）相关性分析：①EAE对照组及Ast各剂量组发病潜伏期与大鼠脑组织内PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈负相关（P0.01或P0.05），与脑组织内PARP-1含量和血清中IL-4含量呈正相关（P0.01或P0.05）。②EAE对照组及Ast各剂量组发病进展期与大鼠脑组织内PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈正相关（P0.01或P0.05），与脑组织内PARP-1含量和血清中IL-4含量呈负相关（P0.01或P0.05）。③EAE对照组及Ast各剂量组发病高峰期大鼠神经功能障碍评分与大鼠脑组织内PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈正相关（P0.01或P0.05），与脑组织内PARP-1含量和血清中IL-4含量呈负相关（P0.01或P0.05）。结论：1.PGE2及EphA4在EAE大鼠发病过程中含量均升高，PARP-1含量下降，PGE2、EphA4和PARP-1含量均与发病潜伏期、进展期以及发病高峰期大鼠神经功能障碍评分密切相关，提示PGE2、EphA4及PARP-1在EAE疾病发生发展过程中发挥着重要作用。2.TNF-a、IL-17及IL-2在EAE大鼠发病过程中含量均上升，IL-4含量下降，TNF-a、IL-17、IL-2和IL-4含量均与发病潜伏期、进展期及发病高峰期大鼠神经功能障碍评分密切相关，提示TNF-a、IL-17、IL-2及IL-4在EAE疾病的病情衍变过程中具有重要作用。3.不同剂量组Ast均可不同程度降低EAE大鼠的发病率，延长发病潜伏期，缩短疾病进展期，降低疾病高峰期神经功能障碍评分，改善EAE大鼠脑组织病理学改变，提示Ast对EAE大鼠发病可能具有防治作用，且防治作用与剂量相关。4.Ast对EAE大鼠发病具有防治作用所涉及的机制可能包括抑制PGE2和EphA4的产生，减少TNF-、IL-17和IL-2的分泌以及上调PARP-1的表达，增加IL-4的合成。
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【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R744.3

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