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过氧化氢干预下Rab30在PC12细胞中的表达及促凋亡通路

发布时间:2019-07-31 18:34
【摘要】:目的探讨经过氧化氢(H_2O_2)损伤干预下Rab30在PC12细胞中的表达及可能的促凋亡通路。方法将体外常规培养的PC12细胞分为正常组和H_2O_2组。采用MTT检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western-blot检测Rab30、JNK3、GM130、Caspase-3的蛋白表达情况。结果 H_2O_2损伤干预可导致PC12细胞的存活率显著降低(P0.05),早期凋亡率和总凋亡率均显著增高(均P0.05);JNK3、Caspase-3蛋白表达水平在PC12细胞中显著增加(P0.05),而Rab30、GM130蛋白表达显著下降(P0.05)。结论 H_2O_2在PC12细胞中的促凋亡通路可能是H_2O_2激活JNK3的表达而靶向下调Rab30,致使高尔基体结构破碎,并激活Caspase-3的活性,从而诱导PC12细胞的凋亡。
【图文】:

过氧化氢干预下Rab30在PC12细胞中的表达及促凋亡通路


图1显微镜下正常培养条件下PC12细胞形态结构(10×40)。2.2H2O2对PC12存活率的影响经200ΜmH2O2处理5h后的PC12细胞存活率较正常培养的细胞明显减少。H2O2组的吸光度A值(0.1577±0.0100)与正常组(0.2553±0.0084)比较明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。2.3H2O2对PC12凋亡率的影响结果显示正常组PC12细胞绝大部分均为双阴性细胞(图1A,左下象限),正常组细胞结构完整,无明显细胞凋亡或死亡;而经H2O2损伤干预后PC12细胞的凋亡率明显增加(图1B,,右上象限和右下象限),即H2O2组(32.7500±1.0485;46.1167±1.1501)的早期凋亡率及总凋亡率与正常组(0.5033±0.0216;0.6333±0.0450)的比较显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2和图2。表1MTT法检测两组PC12细胞存活率的比较(x±s)实验分组NA值正常组60.2553±0.0084H2O2组60.1577±0.0100a注:a为与正常组比较,P<0.05。表2AnnexinV/PI双染法检测两组PC12细胞的凋亡比较[%;(x±s)]组别N早期凋亡率总凋亡率正常组60.5033±0.02160.6333±0.0450H2O2组632.7500±1.0485a46.1167±1.1501b注:a为与正常组的早期凋亡率比较,P<0.05;b为与正常组的总凋亡率比较,P<0.05。图2AnnexinV-FITC/PI法检测PC12细胞的凋亡率流式细胞分析图。注:A:正常组;B:H2O2组;左下象限:正常活的PC12细胞(双阴性细胞);右上象限:晚期凋亡或死亡的PC12细胞;右下象限:早期凋亡的PC12细胞;左上象限:细胞碎片、损伤的PC12细胞。2.4H2O2对PC12细胞Rab30、JNK3、GM130、Caspase-3蛋白表达的影响H2O2损伤干预后,Rab30、GM130在PC12细胞的表

过氧化氢干预下Rab30在PC12细胞中的表达及促凋亡通路


6333±0.0450)的比较显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2和图2。表1MTT法检测两组PC12细胞存活率的比较(x±s)实验分组NA值正常组60.2553±0.0084H2O2组60.1577±0.0100a注:a为与正常组比较,P<0.05。表2AnnexinV/PI双染法检测两组PC12细胞的凋亡比较[%;(x±s)]组别N早期凋亡率总凋亡率正常组60.5033±0.02160.6333±0.0450H2O2组632.7500±1.0485a46.1167±1.1501b注:a为与正常组的早期凋亡率比较,P<0.05;b为与正常组的总凋亡率比较,P<0.05。图2AnnexinV-FITC/PI法检测PC12细胞的凋亡率流式细胞分析图。注:A:正常组;B:H2O2组;左下象限:正常活的PC12细胞(双阴性细胞);右上象限:晚期凋亡或死亡的PC12细胞;右下象限:早期凋亡的PC12细胞;左上象限:细胞碎片、损伤的PC12细胞。2.4H2O2对PC12细胞Rab30、JNK3、GM130、Caspase-3蛋白表达的影响H2O2损伤干预后,Rab30、GM130在PC12细胞的表达明显下降,而JNK3、Caspase-3在PC12细胞中表达明显增加。即,H2O2组中的Rab30(0.0570±0.0014)的蛋白表达与正常组(0.2272±0.0020)比较,差异有统计学意义(P<0.05);H2O2组中的JNK3(0.6904±0.0211)蛋白表达与正常组(0.1167±0.0024)比较,差异有统计学意义(P<0.05);H2O2组中的GM130(0.0821±0.0038)的蛋白表达与正常组(0.2704±0.0053)比较,差异有统计学意义(P<0.05);H2O2组中的Caspase-3(0.8620±0.0198)的蛋白表达与正常组(0.3232±0.0006)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。·518·JournalofInternationalNeurologyandNeurosurgery2016,43(6)
【作者单位】: 湖南省人民医院马王堆院区卒中中心;湘潭市第一人民医院老年医学科;湖南省人民医院/湖南省老年医学研究所;
【基金】:湖南省自然科学基金(14JJ2143) 湖南省卫计委科研项目(B2013-065;B2012-121)
【分类号】:R741

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本文编号:2521502

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