与C6胶质瘤细胞间接共培养诱导骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化的研究

发布时间：2019-10-08 01:08

【摘要】：目的研究肿瘤微环境对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)分化的影响,明确骨髓间充质干细胞在肿瘤微环境中是否受到其中的细胞因子、信号分子的影响而自身发生分化,探讨与胶质瘤细胞间接共培养诱导骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化的可能性,从而进一步揭示恶性胶质瘤血管形成机制中内皮细胞来源和恶性胶质瘤细胞分泌的细胞因子对间充质干细胞分化为内皮细胞的影响,丰富肿瘤局部微循环建立模式的相关理论。方法取2-3周龄SD大鼠,通过全骨髓差速贴壁法获得原代BMSCs,传代纯化扩增,MTT法绘制第3代和第4代BMSCs的生长曲线。通过倒置相差光学显微镜观察细胞光镜下形态,并通过流式细胞仪检钡BMSCs细胞表面抗原CD44. CD90、CD34和CD45进行细胞表型鉴定。C6胶质瘤细胞采用与BMSCs相同的培养基进行培养。 C6胶质瘤细胞对BMCS诱导实验,根据诱导时间不同分成3组：(1)7d共培养组：7d诱导组以C6胶质瘤细胞以2×105／孔的密度接种于1answell小室上层,下层以2×105/孔的密度接种第4代BMSCs,;7d对照组transwell小室上层下层均以2×105/孔的密度接种第4代BMSCs, BMSCs接种于预先置有盖玻片的下层六孔培养板中,每隔3天换液一次。(2)14d共培养组：14d诱导组以C6胶质瘤细胞以1×105/孔的密度接种于transwell小室上层,下层以1×105/孔的密度接种第4代BMSCs;14d对照组transwell小室上层下层均以1×105／孔的密度接种第4代BMSCs, BMSCs接种于预先置有盖玻片的下层六孔培养板中,每隔3天换液一次。(3)21d共培养组：21d诱导组以C6胶质瘤细胞以5×104/孔的密度接种于1transwell小室上层,下层以5×104/孔的密度接种第4代BMSCs;21d对照组transwell小室上层下层均以5×104/孔的密度接种第4代BMSCs, BMSCs接种于预先置有盖玻片的下层六孔培养板中,每隔3天换液一次。共培养结束后分别取出载玻片,用免疫组织化学检测共培养后BMSCs中血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、内皮细胞特异性标志抗原CD31的表达。结果 1.体外成功获得大鼠BMSCs,其细胞形态单一,呈梭形或扁平型,增殖至细胞融合时呈漩涡状和放射状排列,细胞生长曲线典型,细胞表面抗原鉴定CD44阳性(平均阳性率98.4%),CD90阳性(平均阳性率98.7%),CD34阴性(平均阳性率2.5%),CD45阴性(平均阳性率4.5%)。 2.与C6胶质瘤细胞共间接共培养后,BMSCs向内皮细胞分化,免疫组织化学检测结果显示,与C6胶质瘤细胞间接触共培养,随着诱导时间的增加,BMSCs表达vWF和CD31增多,BMSCs形态发生变化,向内皮细胞分化。结论 1.差速贴壁法体外成功获得大鼠BMSCs,其细胞形态单一,呈梭形或扁平型,增殖至细胞融合时呈漩涡状和放射状排列,细胞生长曲线典型。 2.与C6胶质瘤细胞间接共培养可诱导BMSCs向内皮细胞分化,表现为BMSCs表达内皮细胞特异性蛋白vWF和CD31表达的增多,和细胞形态的变化。
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.41

【参考文献】