cAMP-PKA-pCREB信号通路介导康复训练促进脑缺血后大鼠的运动功能恢复
发布时间：2019-10-18 12:11
【摘要】：目的：康复训练是是目前缺血性脑卒中恢复期促进神经功能恢复的有效治疗措施之一。研究证实缺血性脑卒中后给予针对性的功能训练和活动有利于缺损神经功能的恢复，提高患者的日常生活质量[1-3]。同时cAMP-PKA-pCREB信号通路的激活可明显促进损伤轴突再生[4-6]，改善CNS损伤后的神经功能障碍。因此，为求进一步探索康复训练促进缺血性卒中后的神经功能恢复机制是否与cAMP-PKA-pCREB信号通路的激活促进损伤轴突再生有关，我们拟以cAMP-PKA-pCREB这条信号通路为切入点，通过观察康复训练对脑梗死后大鼠脑组织内cAMP、总PKA含量以及PKAc、pCREB蛋白表达变化的影响，结合轴突再生标志物GAP-43蛋白表达变化的检测和平衡木试验对实验性大鼠运动功能的评价，阐述cAMP-PKA-pCREB信号通路在康复训练促进脑梗死后大鼠的运动功能恢复过程中的具体作用，，为临床康复治疗提供新的理论支持。 方法：采用成年健康的SD雄性大鼠，参照Longa改良线栓法进行大脑中动脉缺血灌注（MACO）模型的制备，缺血2h后再灌注。模型成功的大鼠随机分为自然恢复组、自然恢复+Rp-cAMP组、康复训练组和康复训练+Rp-cAMP组，PKA抑制剂Rp-cAMP于侧脑室注射后立即进行MACO模型的制备。同时设立假手术组。康复训练的实验性大鼠均于术后48h开始训练。时间点设立为术后2d、7d、14d和21d。通过酶联免疫法检测脑组织内cAMP、总PKA的含量变化，Western Blot检测脑组织内PKAc、pCREB蛋白的表达变化，同时采用免疫组化法进行pCREB、PKAc、GAP-43蛋白表达的定位检测及GAP-43蛋白表达的半定量分析，应用平衡木试验对实验性大鼠进行运动功能评价。 结果：（1）运动功能评分结果：自然恢复组大鼠的平衡木试验评分低于自然恢复+Rp-cAMP组；康复训练组大鼠明显低于自然恢复组，也低于康复训练+Rp-cAMP组；（2）脑组织内cAMP、总PKA的含量和PKAc、pCREB蛋白表达的结果:自然恢复组大鼠高于自然恢复+Rp-cAMP组，康复训练组大鼠明显高于自然恢复组，也高于康复训练+Rp-cAMP组；（3）脑组织GAP-43蛋白表达结果：自然恢复组大鼠高于自然恢复+Rp-cAMP组，康复训练组大鼠明显高于自然恢复组，也高于康复训练+Rp-cAMP组。以上改变均于术后14d最为明显。 结论：（1）脑组织缺血后脑组织内cAMP、总PKA的含量增加，PKAc及其下游pCREB蛋白的表达也增强，同时GAP-43蛋白表达也随之明显增加。（2）康复训练可明显增加脑组织cAMP、总PKA的含量，促进PKAc、pCREB蛋白的表达，同时GAP-43蛋白的表达也随之明显增加。（3）侧脑室注射Rp-cAMP可可明显抑制MACO大鼠脑组织内总PKA、PKAc和pCREB蛋白的表达，并明显的拮抗了康复训练对以上指标的促进作用。（4）康复训练可明显改善MACO大鼠的运动功能。（5）侧脑室注射Rp-cAMP可明显减弱康复训练对运动功能的改善作用。这些研究发现提示，cAMP-PKA-pCREB信号通路的激活促进损伤轴突再生参与了脑缺血后的神经功能的自然恢复，同时也是康复治疗促进脑缺血后大鼠神经功能恢复的可能机制之一。
【图文】：
重庆医科大学硕士研究生学位论文21图1 各组大鼠不同时间点的运动功能评分比较Fig.1 Comparision of the scores of motor function test in each group at different time points.2 指标检测结果2.1 实验性大鼠脑组织 cAMP、总 PKA 的含量变化不同时间点各组大鼠脑组织内cAMP含量的结果见表2、图2，总PKA含量的结果见表3、图3。康复训练组的大鼠脑组织内cAMP、总PKA含量明显高于自然恢复组，结合大鼠的运动功能评分结果，提示康复训练促进脑缺血后大鼠的运动功能恢复与脑组织内cAMP、总PKA含量的增加有关；侧脑室给予PKA抑制剂Rp-cAMP后，自然恢复组的大鼠脑组织内总PKA含量的表达明显减少，同时也抑制了康复训练对脑缺血后脑组织内总PKA含量的促进作用，结合运动功能评价结果提示cAMP-PKA信号通路参与了康复训练促进脑缺血后大鼠运动功能的恢复过程。
▲P＜0.05图2 各组大鼠不同时间点的脑组织内cAMP含量的变化趋势图Fig.2 The concentration of cAMP in the rats at different time points.表3 各组大鼠不同时间点的脑组织内总PKA含量变化注：与自然恢复组比较，* P＜0.05，与康复训练组比较，▲P＜0.05分组例 数（只）cAMP（nmol/100 mg）术后2 d 术后7 d 术后14 d 术后21 d假手术组 12 46.48±2.10 45.82±1.87 45
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3
本文编号：2551080
【图文】：
重庆医科大学硕士研究生学位论文21图1 各组大鼠不同时间点的运动功能评分比较Fig.1 Comparision of the scores of motor function test in each group at different time points.2 指标检测结果2.1 实验性大鼠脑组织 cAMP、总 PKA 的含量变化不同时间点各组大鼠脑组织内cAMP含量的结果见表2、图2，总PKA含量的结果见表3、图3。康复训练组的大鼠脑组织内cAMP、总PKA含量明显高于自然恢复组，结合大鼠的运动功能评分结果，提示康复训练促进脑缺血后大鼠的运动功能恢复与脑组织内cAMP、总PKA含量的增加有关；侧脑室给予PKA抑制剂Rp-cAMP后，自然恢复组的大鼠脑组织内总PKA含量的表达明显减少，同时也抑制了康复训练对脑缺血后脑组织内总PKA含量的促进作用，结合运动功能评价结果提示cAMP-PKA信号通路参与了康复训练促进脑缺血后大鼠运动功能的恢复过程。
▲P＜0.05图2 各组大鼠不同时间点的脑组织内cAMP含量的变化趋势图Fig.2 The concentration of cAMP in the rats at different time points.表3 各组大鼠不同时间点的脑组织内总PKA含量变化注：与自然恢复组比较，* P＜0.05，与康复训练组比较，▲P＜0.05分组例 数（只）cAMP（nmol/100 mg）术后2 d 术后7 d 术后14 d 术后21 d假手术组 12 46.48±2.10 45.82±1.87 45
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 牛陵川;李长清;陈艳;刘圣山;黄莹;;双丁酸环腺苷酸促进脑缺血再灌注大鼠轴突再生和运动功能恢复[J];中国老年学杂志;2009年07期
2 张燕虹;李长清;牛陵川;;康复训练对脑缺血大鼠运动功能恢复和脑组织cAMP-PKA信号通路的影响[J];中国实验动物学报;2013年06期
本文编号：2551080
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