视神经脊髓炎谱系疾病患者外周血B细胞研究

发布时间：2019-11-09 20:26

【摘要】：目的视神经脊髓炎谱系疾病(Neuromyelitis Optica Sprectrum Disorders,NMOSD)是一种由抗体介导的中枢神经系统自身免疫性星形胶质细胞病,是造成我国青壮年神经系统功能残障的重要疾病之一。本研究拟通过检测急性期NMOSD患者及接受大剂量甲基泼尼龙(High dose methylprednisolone,HDMP)冲击治疗后外周血B细胞及其亚型:调节性B细胞(Regulatory B cells,Bregs)、分泌白介素10的B细胞(B cells secreting interleukin-10,B10s)、记忆B细胞(Memory B cells,Bmems)、浆细胞等细胞水平,分析急性期NMOSD患者与HCs相比外周血B细胞及其亚型的变化,探讨HDMP冲击治疗对急性期NMOSD患者外周血B细胞及其亚型的影响。分析NMOSD患者应用优化小剂量的利妥昔单抗(Rituximab,RTX)治疗的效果及启动RTX治疗的合理时机,分析外周血B细胞变化与病情的相关性,并检测NMOSD患者接受RTX治疗后外周血中抗利妥昔单抗抗体(Antirituximab antibody,ARA)水平,探讨ARA产生对NMOSD患者RTX治疗效果的影响。方法纳入急性期NMOSD患者13例,与10例年龄性别匹配的HCs。提取NMOSD患者HDMP治疗前后及HCs外周血单个核细胞(Peripheral blood monouclear cells,PBMC),应用流式细胞仪检测分析外周血中B细胞及亚型的比例及数量。纳入接受优化小剂量RTX治疗的患者16例,收集患者人口学、临床资料、B细胞监测情况,对启动RTX早晚、不同时期、不同残疾状态的患者的治疗效果进行比较和分析。应用酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒对16例应用RTX治疗预防复发的患者血标本进行ARA测定,并对ARA阳性及阴性的患者进行治疗效果的比较和分析。对其中6例患者进行随访,动态监测B细胞并分析。结果1.急性期NMOSD患者外周血CD19+B细胞数量及频率较HCs并无明显差异(p0.05),CD19+CD24hi CD38hi Bregs数量及频率降低(p0.05),CD19+IL-10+B10s细胞数量及频率降低(p0.05),CD19+CD27+Bmems数量及频率无明显差异(p0.05),CD19+CD138+浆细胞数量及频率升高(p0.05)。2.急性期NMOSD患者外周血CD19+CD24hi CD38hi Bregs数量及频率在接受HDMP冲击治疗后较HDMP治疗前相比降低(p0.05),CD19+IL-10+B10s数量及频率无明显变化(p0.05),CD19+CD27+Bmems数量及频率升高(p0.05)。CD19+CD138+浆细胞数量及频率降低(p0.05)。3.重复小剂量的RTX治疗可以显著降低NMOSD患者的复发次数、年复发率(Annual relapse rate,ARR)及残疾程度(p0.05)。距离首次发病1年内或1年后接受RTX治疗的患者各临床指标间并无明显差异(p0.05)。缓解期接受RTX治疗的患者比急性期接受治疗的患者发作次数、ARR及扩展开残疾状态量表(Expanded disability status scale,EDSS)均显著好转(p0.05)。无论在启动RTX治疗时EDSS评分高低,接受RTX治疗后患者发作次数、ARR及残疾程度均显著好转(p0.05)。4.接受小剂量的RTX治疗的6例NMOSD患者治疗前后CD19+CD24hiCD38hiBregs数量及频率并无显著差异(p0.05),RTX治疗反应好的3例患者中Bregs回升较治疗反应差的患者快(p0.05)。CD19+CD27+Bmems数量及频率在RTX治疗后降低(p0.05),而在Bmems删除及回升方面,治疗效果好者与效果差者两组间并无显著差异(p0.05)。5.16例接受RTX治疗的患者中3例出现ARA,并且ARA阴性患者于治疗前后的复发次数比ARA阳性患者显著降低(p0.05),但残疾程度在两组中均无显著变化(p0.05)。ARA的出现使得患者输注RTX的周期缩短、频率增加,其中1例ARA阳性患者出现了严重的并发症。结论:1.尽管急性期NMOSD患者外周血CD19+B细胞与HCs比较并无显著差异,但是具有调节功能的CD19+CD24hiCD38hiBregs细胞及CD19+IL-10+B10s细胞数量减少,可能调节功能受损。在NMOSD患者急性发病中CD19+CD138+浆细胞数量升高并分泌自身抗体,发挥致病作用。2.尽管HDMP抑制了CD19+CD24hi CD38hi Breg细胞数量及频率,但对能分泌IL-10的B细胞数量与频率没有影响,仍可通过分泌IL-10发挥免疫调节功能。HDMP可能不能够抑制Bmems的增殖,不能控制疾病的复发。HDMP能够减少CD19+CD138+浆细胞产生致病性抗体,从而控制病情进一步进展。小剂量糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)不能明显抑制与体液免疫直接相关的Bmems及浆细胞数量及频率,单用小剂量GC可能不能完全控制NMOSD疾病复发。3.优化小剂量的RTX在NMOSD患者中预防复发有效,能够减少复发次数、ARR并改善残疾程度。NMOSD患者无论是否能在首次发病1年内启动RTX治疗,在启动治疗后患者均可获益。NMOSD患者在缓解期启动治疗临床反应更好。Bregs回升速度快慢可能反映RTX治疗反应好坏,Bmems回升速度可能与RTX治疗疗效无关。4.在应用小剂量RTX间歇补充治疗预防NMOSD复发的患者血浆中存在ARA。接受RTX治疗的NMOSD患者,血浆中是否可检测到ARA与NMOSD临床特点不相关。ARA的出现可能不影响RTX删除外周血B细胞的药物功能,但可能加速RTX降解或封闭其有效蛋白,相对减弱其药效。监测外周血CD19+细胞频率,调整RTX补充治疗间隔,仍可维持RTX控制NMOSD复发的临床疗效。ARA的出现可能诱导并发症的发生。
【图文】：

急性期,外周血,细胞,淋巴细胞

期 NMOSD 患者及 HCs 外周血 CD19+B 细胞频率，图中方框表流式细胞仪中入门的 CD19+B 淋巴细胞。9+B淋巴细胞占PBMC百分比及CD19+的B淋巴细胞绝对值急性期与 HCs 相比均无明显差异。OSD 急性期及 HCs 外周血 CD19+CD24hiCD38hiBregs 细胞比较式细胞仪测定 13 例急性期 NMOSD 患者及 10 例 HC24hiCD38hiBregs 细胞（图 3 ）。急性期 NMOSD 患者24hiCD38hiBregs 细胞占 PBMC 百分比为（0.79±0.52）%.09）%相比显著降低，p=0.0154。急性期 NMOSD 患24hiCD38hiBregs 细胞绝对值较 HCs 显著降低[（0.66±0.

急性期,B淋巴细胞,绝对值,淋巴细胞

9+B淋巴细胞占PBMC百分比及CD19+的B淋巴细胞绝对值急性期与 HCs 相比均无明显差异。OSD 急性期及 HCs 外周血 CD19+CD24hiCD38hiBregs 细胞比较式细胞仪测定 13 例急性期 NMOSD 患者及 10 例 HC24hiCD38hiBregs 细胞（图 3 ）。急性期 NMOSD 患者24hiCD38hiBregs 细胞占 PBMC 百分比为（0.79±0.52）%.09）%相比显著降低，p=0.0154。急性期 NMOSD 患24hiCD38hiBregs 细胞绝对值较 HCs 显著降低[（0.66±0..01）×104，p=0.0153]；CD19+CD24hiCD38hiBregs 细胞占 CD在急性期NMOSD患者较HCs显著降低（[6.08±3.92）%，（11.2]（图 4）。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R744.52

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